罗汉果醇（苷元）的代谢及其代谢产物的分布研究

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1、c分类号：R285学号：111018密级：公开学位类型：学术学位硕士学位论文罗汉果醇（苷元）的代谢及其代谢产物的分布研究研究生：陈兵导师：李典鹏研究员所属学院：药学院专业：药物化学研究方向：天然药物化学成分研究完成日期：2014年05月20日广西﹒南宁基金项目：2011年度国家自然科学基金（资助号：81160392、81160518）原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或

2、撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：日期：关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广西中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广西中医药大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密论文在解密后遵守此规定）论文作者签名：导师签名：日期：日期：罗汉果醇（苷元）的代谢及其代谢产物的分布研究中文摘要目的：本课题拟通过从罗汉

3、果皂苷V（50%）水解产物中分离得到足量的罗汉果醇（苷元）单体（纯度≥98%），进而建立罗汉果醇在体外及SD雄性大鼠体内的代谢模型及方法，最终借助高压液相与质谱联用技术分离鉴定其代谢产物，并探析罗汉果醇体内外的代谢途径和裂解规律，从而阐明罗汉果醇在体内外代谢的特点与规律，为罗汉果的进一步开发提供科学依据。方法：（1）罗汉果醇（苷元）的制备：采用5%H2SO4甲醇溶液水解50%罗汉果皂苷V，水解液经氯仿萃取旋干得到粗提物，结合硅胶柱色谱及制备液相色谱等分离技术制备得纯度达98%的罗汉果醇（苷元）单体。（2）罗汉果醇（苷元）体外代谢实验研究：①、运用SD雄性大鼠肝

4、S9体外孵化结合液质联用的方法研究罗汉果醇在肝脏中的代谢成分。②、罗汉果醇置于含有人的肠内菌群的培养基中，37℃厌氧条件下培养48h，用甲醇超声提取，应用高压液相与质谱联用技术检测分析其代谢成分。③、应用人肝癌细胞（HepG2）进行转化，并用液质联用技术检测其代谢成分。④、将单体罗汉果醇置于人工胃液中，37℃恒温水浴下水解，考察罗汉果醇在0h、1h、2h、3h、4h这5个时间点的稳定性，从而了解罗汉果醇口服后在胃液中的水解成分。（3）罗汉果醇（苷元）体内代谢实验及其代谢产物的分布研究：按100mg/kg剂量将罗汉果醇单体灌胃SD雄性大鼠，收集给药前后大鼠的粪便

5、、尿液、血液和心、肝、脾、肺、肾、肠、胃组织作为生物样品，将各生物样品进行纯化后，n采用HPLC-ESI-IT-TOF-MS技术检测其体内代谢成分，利用岛津液质数据分析工作站对代谢产物进行推导和分析。（4）罗汉果醇（苷元）体内代谢产物的分离及鉴定：采用高分辩质谱，一维和二维核磁共振波谱技术鉴定单体成分的化学结构。结果：（1）从50%罗汉果皂苷V水解液中分离并得到罗汉果醇（苷元）。通过利穗低中压制备色谱，岛津制备液相色谱制备得到5g罗汉果醇单体（纯度≥98%）。（2）罗汉果醇体外实验结果证明：罗汉果醇在人工胃液和人的肠道菌群培养液以及HepG2细胞中均有部分代谢

6、，代谢产物主要是罗汉果醇的氧化产物，此次共发现体外代谢产物4个。但本实验中罗汉果醇在大鼠肝S9体外孵化体系中代谢并不像体内一样明显，可能的原因有酶的活性、酶量、孵化的时间、孵化的体系、以及与体内不一样的复杂体系等，因此还需进一步实验证实。（3）通过罗汉果醇的体内代谢实验，从体内各生物样品中发现了罗汉果醇的代谢产物60个，其转化途径主要是发生了羟基化和脱氢反应，增加1-4个羟基，脱去2和或者4个氢，其中还有两个增加了一个甲氧基。其中粪便中发现代谢产物60个，尿液中29个，血浆中11个，组织中44个（心：3个、肝：23个、脾：0个、肺：3个、肾：5个、肠：28个、

7、胃：19个），在尿液、血浆及组织中发现的代谢产物均能在粪便找到。（4）采用柱色谱及高压液相制备方法从灌胃给药大鼠粪便中共分离得到12个单体代谢产物，采用高分辩质谱，一维和二维核磁共振波谱技术鉴定了4个化合物结构，且均为新的化合物。在体内各生物样品中仍可检测到原形罗汉果醇的存在，在血液中可以检测到罗汉果醇的氧化成分，推测其可能为吸收入血液的有效成分。从代谢产物来看，罗汉果醇在大鼠体内主要发生羟基化反应。结论：通过对罗汉果醇单体在大鼠体内、体外吸收与代谢成分分析，并分离鉴定了罗汉果醇在体内的代谢产物，掌握了罗汉果醇的体内外的代谢途径、特点及规律，为罗汉果的应用和开

8、发提供了科学依据。关键词：罗汉果醇，代