中国西南地区原发性心肌病与线粒体基因改变的相关性研究

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1、中图分类号：R542.2)医蚵必謦一:_^:八SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文中国西南地区原发性心肌病与线粒体基因改变的相关性研究院（系)、所临床医学院研究生姓名芊雨浓学科、专业内科学导师姓名范忠才教授,>....二〇—五年四月目录1中国西南地区原发性心肌病与线粒体基因改变的相关性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.11.1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11.2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61.3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131.4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151.5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291.6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯441.7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯561.8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯571.9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯632致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯653心肌病中线粒体tRNA突变的研究进展（综述）⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯662中国西南地区原发性心肌病与线粒体基因改变的相关性研究摘要目的：扩张型心肌病（DilatedCardiomyopathy，DCM）、肥厚型心肌病（HypertrophicCardiomyopathy，HCM）是原发性心肌病中最常见的两类，均属于遗传性心肌病范畴，具有明显的遗传学背景。目前研究已经发现超过30种基因与DCM相关，超过20种基因，1400余种突变与HCM相关。由于心脏对氧化代谢具有特殊的依赖，线粒体作为氧化磷酸系统（oxidativePhosphorylation,OXPHOS）产能的关键，其结

4、构和功能改变在心脏受损中的作用越来越受到关注。迄今为止，超过300个致病线粒体基因（mtDNA）点突变被发现，包括蛋白编码基因、tRNA基因、rRNA基因，并且最常见于线粒体tRNA（mttRNA）与线粒体蛋白编码基因cytb（mtcytb）中。由于中国对线粒体基因突变报道较少，故中国西南地区、乃至中国人群是否存线粒体基因突变或多态性，突变与多态性是否与原发性心肌病（DCM、HCM）相关，尚无足够证据。故本实验筛选线粒体基因组中最易致变的mtcytb、mttRNA中的Gln、Ile、Leu、Lys、Pro、Val、Se

5、r七个基因来寻找我国DCM、HCM是否存在线粒体基因突变或多态性，并对比其是否为突变热点或新发突变，探讨线粒体基因改变在中国西南地区患者中的发病状况，并分析其与这两种心肌疾病发病的相关性，进而为我国西南地区汉族人群线粒体基因与原发性心肌病的遗传相关性研究提供更多的证据及方向，并有可能为将来的基因治疗提供理论依据。方法：研究对象选取中国西南地区的汉族人群，其中DCM患者120例，明确家系1例；HCM患者65例，明确家系2例；健康对照者200例。研究对象均行超声心动图、心电图检查，对3家系绘制遗传图谱。研究采用病例对照研究

6、，将mtcytb、mttRNAGln、mttRNAIle、mttRNALeu、mttRNALys、mttRNAPro、mttRNAVal、mttRNASer整个基因序列作为扩增的目的序列，采用DNA试剂盒从患者和健康对照者外周血中提取DNA作为扩增的模板，用primerprimer5软件设计特异性引物、聚合酶链扩增反应（Polymerasechainreaction，PCR）扩增目的序列，扩增产物行琼脂糖凝胶电泳、Goldview染色技术、紫外线分光仪测量、凝胶成像、Sanger双脱氧链终止法测定所有扩增产物的碱基序列

7、，分析所得的序列图，并将测得碱基序列同线粒体数据库中上述基因的全基因序列进行比对，得出与DCM或HCM相关的多态（SingleNucleotidePolymorphisms，SNP）或突变位点，计算SNP在患者与健康对照者间的频率，用独立样本t检验比较患者与健康对照者之间多态位点频率的统计学差异。突变点与200例健康对照者进行序列比对及分析；对临床伴发听力障碍的早发DCM家系直接行线粒体全基因组测序及分析。结果：1.研究对象临床特点分析：HCM患者心肌明显增厚，多数患者伴轻度心功能不全，心电图改变以T波改变为主。DCM

8、患者全心明显增大，左心功能明显降低，多数患者心功能为中-重度心功能不全（根据NYHA分期），心电图改变以QRS增宽为主。2.HCM患者线粒体基因分析结果：①在mttRNAGln基因上发现1个突变位点（m.4395A>G）,发现于HCM家系2；HCM家系1、其余HCM患者、DCM患者及200例健康对照者中无此位点改变。此位点碱基由A