线粒体trnatrp5512ag突变与原发性高血压的相关性研究

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1、万方数据论文题目：线粒佳型鲤§墨12盆鱼塞变生厦筮性商鱼匿的扭差性班究答辩委员会主席：鲑江教援答辩委员会成员：自童丕熬握题连堡麴握万方数据中英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9一、家系临床资料和外周血的采集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9二、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12三

2、、实验方法与步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27一、家系成员临床资料与家系图分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27二、验证母系成员线粒体基因突变住点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27三、先证者线粒体全序分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28四、正常对照以及先证者永生化淋巴母细胞系的构建与培养⋯30五、正常对照及家系成员永生化淋巴细胞系的鉴定分析⋯⋯⋯3l六、NorthernBlot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32七、WesternBlot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33八、细胞功能方面分析(

3、包括细胞内活性氧以及ATP检测)⋯34分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37综j连⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62万方数据温州医科大学硕士学位论文万方数据温州医科大

4、学硕士学位论文2万方数据温州医科大学硕士学位论文线粒体tRNAnP5512A>G突变与原发性高血压相关性的研究中文摘要目的1．通过对细胞功能水平层面研究线粒体tRNATrp5512A>G突变与原发性高血压的相关性。方法1．调查和收集携带线粒体tRNAXrp5512A>G突变的家系的临床资料，绘制家系图，从遗传角度对患者家系进行分析。2．应用生物学分析软件CodonCodeAligner对先证者线粒体全序与修订的剑桥标准参考序列进行比对分析，应用生物学分析软件ClustalX对17种灵长类物种线粒体tRNATw5512位点进行保守性分析。3．采集先证者及其他母系成员和正常对照外周血，分离淋巴细胞

5、，利用EB病毒构建携带线粒体tRNATrP5512A>G突变和正常对照永生化淋巴母细胞系(1ymphoblastoidcelllines，LCLs)。4．在分子水平上运用NorthernBlot杂交技术对线粒体tRNA稳态水平进行分析、运用WesternBlot技术分析线粒体编码蛋白质表达水平。5．从永生化淋巴母细胞系活性氧水平以及细胞氧化磷酸化产生ATP的能力几个方面分析携带线粒体tRNATrp5512A>G突变对永生化类淋巴母细胞系整体功能的影响。结果1．家系中母系成员5人，其中高血压患者2人，分别为先证者及其女儿，发病年龄分别为81岁和62岁，平均发病年龄7l岁。2．对先证者线粒体全序列

6、分析发现除了携带tRNA’rp5512A>G突变外，还存在26个不同于修订的剑桥标准参考序列的突变。先证者线粒体单体型分析，先证者属于东亚单体型A。线粒体tRNATrp5512位点在17种灵长类物种中保守性高，保守指数为100％。3万方数据温州医科大学硕士学位论文3。携带线粒体tRNArrp5512A>G突变的永生化淋巴细胞系线粒体tRNA唧平均稳态水平是对照组的24．2％(P=0．0120)，线粒体tRNA4aa，tRNAhu(ctm)，tRNAne，tRNALeu(UUR)和tRNASer(UCN)的稳态水平分别是对照组的l10．52％，】05．88％，l16．03％，l08．59％和99

7、．87％。4．携带线粒体tRNATrp5512A>G突变的永生化淋巴细胞系线粒体编码蛋白质ND5、CYTB、C01、C02、C03和A6平均表达水平与正常对照无显著差异。5．氧胁迫下携带线粒体tRNATrp5512A>G突变的永生化淋巴细胞系的ROS增长相对值是正常对照的121％．155％，平均值为144％(P=0．000)。6．在以葡萄糖为碳源的培养基中，携带线粒体tRNArIp5512A>G突