中国汉族人精子线粒体ND2基因变异与完全受精失败的相关性研究

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1、学校代码10459学号或申请号201522454024密级公开专业硕士学位论文中国汉族人精子线粒体ND2基因变异与完全受精失败的相关性研究作者姓名：张金兰导师姓名：毛跟红副教授专业学位名称：妇产科学培养院系：第二临床学院完成时间：2018年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterAssociationbetweenspermmitochondrialND2genevariantsandtotalfertilisationf

2、ailureinChineseHanpopulationBy:JinlanZhangSupervisor:GenhongMaoDepartmentofObstetricsandGynecologyTheSecondClinicalCollegeMay2018学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明

3、。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解

4、密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日中国汉族人精子线粒体ND2基因变异与完全受精失败的相关性研究研究生张金兰导师毛跟红副教授郑州大学第二临床学院妇产科河南郑州450014摘要背景与目的目前，不孕症已经成为涉及全球各个国家和地区育龄夫妇的重要生殖健康问题。在我国，由男方因素导致不孕的夫妇约占50%，且多半同精子质量下降以及性功能障碍有关。虽然随着医学技术的发展，不孕症能应用辅助生殖技术解决一些问题，但仍有5-15％不孕夫妇发生完全受精失败。而常规体外受精（invitrofertilizatio

5、n,IVF）和卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmicsperminjection,ICSI)的显微受精后，在一定时间内精卵没能被结合成合子，没有出现精原核和卵原核，被定义为完全受精失败（totalfertilizationfailure,TFF）。完全受精失败的过程复杂且不可预见，它会对不孕症患者在生活上以及经济上造成很大的压力。近年来有研究表明精子活力、弱精症与精子线粒体有相关性，但对于体外受精完全失败的研究并不多。因此，我们如果了解了造成TFF的发生机制和原因，对于预防体外受精失败

6、具有非常重要的意义。但目前，关于完全受精失败的具体机制，国内外研究仍知之甚少。我们前期研究中发现MT-ATP6变异可能是IVF失败的原因，但MT-ND3的10397同义变异可能有助于降低发生体外受精失败的风险。此次探讨精子线粒体ND2（MT-ND2）基因变异与完全受精失败（TFF）的关系，为预测完全受精失败提供有益的探索。方法（1）临床资料：研究对象为新鲜体外受精（IVF）周期或部分卵子胞浆内单精子注射（Half-ICSI）周期中的中国汉族人精子，从2011年7月至2017年5I月期间在郑州大学第二

7、附属医院收集的共246例。（2）将246例新鲜中国汉族人精子（在IVF周期或者half-ICSI中）依据完全受精失败的定义分将其为两组。回顾性分析比较完全受精失败组共59例和对照组共187例（受精率>50%）。（3）实验采用续密度梯度离心法分离精液样本，然后提取精子线粒体DNA，应用巢式PCR和直接DNA测序分析精子线粒体基因变异。分析结果与线粒体的人类剑桥序列（rCRS）来源于Mitomap数据库（www.mitomap.org）进行比对，并分析变异位点编码的氨基酸是否发生变异。（4）统计学分析：

8、计数资料用百分比（％）和数表示，计量资料用平均数±标准差表示。计量资料使用独立样本t检验来分析，计数资料使用FDR校正（BH方法）来进行卡方检验或Fisher精确检验分析。多变量logistic回归分析来分析线粒体变异与TFF之间的关系，以及进行53对倾向得分匹配分析，双侧P值小于0.05则认为差异具有统计学意义。结果（1）在MT-ND2基因中共发现32个纯合变异位点和47个杂合变异位点。32个纯合变异中有7个错义变异，25个同义变异，两组间的差异无统计学意义。（2）