正常男性和白细胞精子症患者精子线粒体基因缺失和含量的研究

《正常男性和白细胞精子症患者精子线粒体基因缺失和含量的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国协和医科大学硕士学位论文原创性及知识产权声明：l、本硕士论文涉及的课题，从构思、设计、实验、资料整理以及论文撰写均在国家人口计生委科学技术研究所贾孟春研究员指导下完成。本论文中涉及的资料、结果等知识产权归属国家人口计生委科学技术研究所所有。2、在本论文正常发表之前，知悉者负有保密义务，任何单位以及个人均不得引用、复制或者发表本论文之内容，更不得用于申报专利或者成果。3、实验过程中曾得到许多老师、同学的指导、帮助和支持，本人均已在论文中提出并致谢。4、本论文中所有数据均来自原始实验记录，引用资料均已注明，任何数据

2、绝无剽窃、篡改及抄袭行为。5、如在本论文的原始性方面出现问题，本人愿意承担法律责任。特此声明，依次为据。硕士研究生：周万灏导师：贾孟春2007年5月25日中国协和医科大学硕士学位论文正常男性和白细胞精子症患者精子线粒体基因缺失和含量的研究中文摘要本研究的目的是测定正常人与白细胞精子症患者精子线粒体DNA(MtDNA)含量、MtDNA4977bp缺失及体内活性氧(ROS)水平，探讨精液中自细胞增加、活性氧水平升高与精子MtDNA变化的关联。经典理论认为：精子在体外运动唯一能量来源是位于其中部线粒体构成的线粒体鞘。线粒

3、体结构、功能的完整性直接影响精子的活力。而精子活力是衡量男性生育能力的重要指标之一。精子线粒体结构、功能很大程度上影响男性的生育力。线粒体的呼吸链是活性氧(Reactiveoxygenspc圮ias，ROS)的主要来源，正常生理条件下，存在于体内的抗氧化系统可清除过多的ROS；但在某些病理条件下(如：白细胞精子症)可以产生远多于正常情况下的ROS。由于精子线粒体DNA(MtDNA)是无组蛋白包裹裸露的DNA分子、且线粒体内缺乏有效的DNA损伤修复系统，故易造成MtDNA损伤。从而对男性生育能力产生影响。流式细胞仪检

4、测荧光值的方法是利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞进行多参数、快速的定量分析。具有快速、高通量、精确定量的优点。当不发光的lmol／L2．7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)进入细胞后，经过酯酶作用脱去二酯(DA)，生成不发荧光的2。7一二氯氢化荧光素(DcFH)，DCFH被活性氧氧化生成发荧光的2．7一二氯氢化荧光黄(DCF)，由于活性氧自由基的含量与荧光探针的荧光强度成正比，因此可以定性定量的检测活性氧自由基的动态变化。通过此种原理我们对对照组与病例组男性精浆中活性氧的含量进行了检测。我们发现对照组与病例组

5、男性精浆活性氧含量存在显著的差异(p值

6、用荧光实时定量PCR技术对精子MtDNA含量及MtDNA497脚缺失进行定量分析。结果表明：上清层、30％层与80％层中，正常组与病例组精子MtDNA平均含量为1．05．9．78个拷贝。与对照组比较，病例组各层精子MtDNA含量均显著升高，其p值均

7、正相关关系(r=0．347，p<0．0001；r=0．456，p<0．0001)，与上清层精子MtDNA含量无相关性。结论：白细胞增多和活性氧升高可能是导致精子MtDNA含量显著增高的原因之一，但是对于MtDNA497Top缺失的影响尚没有明确结果，有待进一步研究。。关键词白细胞精子症；活性氧；精予MtDNA含量；MtDNA497却缺失；荧光实时定量PCR中国协和医科大学硕士学位论文ABSTRACTTheobjectivesofthestudyaretoevaluatethespermatozoaMtDNAcont

8、entandMtDNA4””deletioninnormalandleukocytospermiamen．andtoinvestigatetherelationshipbetweentheleukocyteandROSwiththechangesofthespermMtDNA．Accordingtoclassictheory，theenergyofsperm