特发性无精子症和严重少精子症患者无精子因子检测的临床意义

《特发性无精子症和严重少精子症患者无精子因子检测的临床意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、南京医科大学硕士学位论文特发性无精子症和严重少精子症患者无精子因子检测的临床意义姓名：宋宁宏申请学位级别：硕士专业：泌尿外科学指导教师：吴宏飞;苏建堂20030420南京医科大学硕士学位论文特发性无精子症和严重少精子症患者无精子因子检测的临床意义TheC1inicalSignificanceofhzoospermiaFactorDetectionforthePatientswithIdiopathicAzoospermiaandSevere01igozoospermia南京医科大学第一附属医院泌尿外科教研室研究生宋宁宏导师吴宏飞苏建堂摘要研究背景据估计全世界约有10％的育龄

2、夫妇不育，其中接近半数的原因是精子发生障碍。在排除输精管梗阻、克氏症和其它泌尿生殖系原因后，无精子症和严重少精子症最有可能的原因就是精子发生基因的异常。关于精子发生基因，特别应关注Y染色体长臂11间隔。Y染色体构成人类基因组的2％，由短臂(Yp)和长臂(Yq)组成。1976年Tiepolo和Zuffardi通过对男性不育症患者Y染色体微缺失的分析，首次提出Y染色体长臂在精子发生过程中扮演着关键的作用。无精子症和严重少精子症的细胞遗传学和分子生物学研究也证实：在人类Y染色体上存在着无精子因子(Azoospermiafactor，AZFo通过分子标记物来显示Y染色体的密度，大量

3、缺失图谱的研究至少能确定三个清楚的、非重叠的区域伴有不同程度生精障碍，位于Y染色体长臂的这三个区域分别命名为AZFa、AZFb和AZFc。据报道这三个区域的微缺失能够干扰精子发生继而引起男性不育。在这些区域里有数个控制精子发生的候选基因，它们在人类精子发生过程中有着重要的功能。1993年，Ma通过对男性不育症患者的研究首先报道了在Y南京医科大学硕士学位论文染色体上一个特殊基因家族的两个eDNA，也就是RBM(RNAbindingmotif)基因。1995年，ReijO通过对无精子症患者Y染色体长臂AZFc间隔的研究发现了DAZ(Deletedinazoospcrmia)基因

4、。RBM、DAZ分别作为AZFb和AZFc区控制精子发生的候选基因，它们编码RNA结合蛋白，同时对结合蛋白具有调节和代谢作用J—戈一。～一，、对特发性无精子症和少精子症患者病因学的研究说明应该对这类病人进行Y染色体微缺失的检测。这样既有利于诊断，同时也可避免一些不必要的治疗，因为目前的治疗不可能改善精子的数量。随着人工辅助生育技术的发展，Y染色体微缺失能够传递给男性子孙，这些男性后代同样面临着不育的问题。实际上，Kent-FriSt的研究已经证实：Y染色体微缺失能够通过胞浆内精子注射(Intracytoplasmicsperminjection，ICSI)传递给男性后代。(

5、，因此，我们应该把这种可能性告诉给不育症夫妇，并向他们解释进行Y染色体微缺失分析的必要性j卜2罔妁^本研究的目的是评估特发性无精子症和严重少精子症患者中Y染色体微缺失发生的频率，并探讨AZF检测的临床意义。材料和方法患者组：所有的患者均来自男性不育症门诊，研究的对象为男性特发性不育患者，年龄28～42岁；50例患者均通过临床检查排除精索静脉曲张、附睾损伤、隐睾、阻塞性无子精症或其它泌尿生殖系疾患；无精子症和严重少精子症(2～5×106／m1)患者的精液标本需连续三次，每次间隔三周，随后经3天禁欲后获得，并符合世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WH

6、O)的诊断标准；所有的患者都有正常的46XY核型，性激素检测正常；此外，38例无精子症患者石蜡包埋的睾丸组织通过病理检查均符合精子发生不完全的诊断。对照组：50例正常男性作为对照，他们均有子女且精子计数>4xl07／ml。基因组DNA来自患者和正常生育者的外周血标本，通过多重聚合酶链反应(P01ymeraSechainreaction，PCR)技术来完成Y染色体微缺失的检测。南京医科火学硕十学位论文结果1．待测的100份标本，经PCR检测均能检出性别决定基因(Sex-determiningregiOilY，SRY)特异性片段，表明所检测的DNA模板符合要求，整个扩增系统有效

7、。2，SRY基因片段扩增长度为472bp，与待测的片段(AZFa／SY84、hZFb／YRRM。、AZFc／DAZ)分剐相差146bp、328bp和122bp，四者能够区别并以此作为内参照。3．50名正常生育男性标本均可见SRY、SY84、YRRM，(RBM。)和SY254(DAZ)扩增带，表明无AZF因子微缺失。4．50例患者标本中均可见SRY及SY84扩增带，表明无AZFa／SY84微缺失。5．50例患者标本中有6例(无精子症4例；严重少精子症2例)可见SRY扩增带，但未见SY254扩增带，表明有AZFc／DA