草原红牛和荷斯坦牛肌肉组织差异表达基因筛选及肉质性状相关基因分析

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1、分类号：S835单位代码：10193密级：公开学号：2012572硕士学位论文草原红牛和荷斯坦牛肌肉组织差异表达基因筛选及肉质性状相关基因分析AnalysisofRedsteppesandHolsteinscreeningdifferentiallyexpressedgenesinmuscleandmeatqualitytraitsrelatedgene作者姓名：王晓楠学位类别：农学硕士专业名称：动物遗传育种与繁殖研究方向：动物分子育种与数量遗传指导教师：单雪松所在学院：动物科学技术学院二〇一五年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进

2、行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，

3、学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要日渐提升的生活水平要求，对国内牛肉市场上的牛肉品质提出了更多的要求，民众的生活中逐渐出现了越来越多的优质或是高档的牛肉产

4、品，这也要求研发人员需要深入进行牛肉的品质研究。通常，我们所说的肉质包含了肉的营养成分、适口性和观感等多方面的内容。在以往，肉品的外观和风味，是消费者所最关心的，也是通过这几个指标对肉质进行评价。随着生物信息学迅速发展，动物遗传育种与繁殖学已经有常规的育种向分子育种转变，与此同时基因差异表达调控机制成为改良遗传性状以及基因功能鉴定的研究热点。本文利用抑制性消减杂交（suppressionsubtractivehybridizationSSH）方法构建了中国草原红牛与中国荷斯坦牛背最长肌差异表达消减cDNA文库,共获得859个差异表达克隆，对全文库进行了测序并与Gen

5、Bank数据库进行比对分析。结果共获得789个新ESTs，84个未知功能蛋白基因，356个已知功能蛋白基因。在已知功能蛋白基因中，表达上调的基因有123个，表达下调的基因有233个,对筛选出的阳性克隆进行功能分类,功能注释结果显示,筛选出的差异基因的功能主要在细胞位置、分子功能和生物过程这三大类中。对于SSH消减文库中所筛选出的克隆，我们采用基因芯片技术对克隆是否存在假阳性进行验证并进一步筛选出差异基因，采用Sam法筛选差异基因,共1296个基因片段,Ratio=2/5情况下，筛选出32个差异表达基因，其中24个基因表达上调，8个基因表达下调；Ratio=4/5情况

6、下有43个差异表达基因，其中18个基因表达上调，25个基因表达下调，结果与SSH文库结果进行比对，基因差异表达情况一致，证明SSH文库质量高，假阳性率低。参照国家标准对草原红牛和普通杂种肉牛的脂肪酸进行测定,前者脂肪酸含量高于后者。挑选出文库筛选出的与脂肪代谢功能相关的差异表达基因GLTPD1和PPARγ，采用荧光定量PCR技术测定两个基因在草原红牛和普通杂种肉牛中的表达量,两者在草原红牛中的表达量高于普通杂种肉牛。将脂肪酸和荧光定量PCR测定结果进行关联性分析,结果说明GLTPD1和PPARγ可以作为研究肉质性状的候选基因。关键词：抑制性消减杂交；基因芯片；荧光定

7、量PCR；肉质性状；中国草原红牛；中国荷斯坦牛IAbstractPeopledemandsmorerequirementsofbeefqualityonthemarketbecauseimprovmentoflivingstandardanditcomesoutmoreandmoregoodqualityorhighgradebeefproductsinreallife,sodeveloperisrequestedintensereserchthequlityofbeef.Asusual,whatwesaythequalityofmeatincludemeato