弓形虫高迁移率族蛋白b1的鉴定及功能

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1、分类号：单位代码：密级：公开学号：博士学位论文弓形虫高迁移率族蛋白的鉴定及功能研究生：王辉指导教师：刘群（教授合作指导教师：申请学位门类级别：农学博士专业名称：预防兽医学研究方向：分子寄生虫学所在学院：动物医学院年月Ph.D.DissertationIdentificationandcharacterizationofhighmobilitygroupbox1proteininToxoplasmagondiiPh.D.Candidate:WangHuiSupervisor:Prof.LiuQunMajor:Preve

2、ntiveVeterinaryMedicineResearchField:VeterinaryParasitologyCollege:CollegeofVeterinaryMedicineChinaAgriculturalUniversityJune,2015本研究获得以下基金资助：国家自然基金（项目编号：、国家教育部博士点基金（项目编号：、国家重大专项（项目编号：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他

3、人已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：年月曰关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，

4、并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）摘要高迁移率族蛋白（是广泛存在于真核生物细胞核内的非组蛋白，具有绑定稳定染色质的功能。释放到胞外的可与细胞表面不同受体结合而发挥不同的生物学效应，主要包括促炎症反应和免疫调节，而阻断的释放或中和胞外己经成为治疗炎症相关疾病的靶标。专性细胞内寄生的弓形虫基因组也编码了此类同源蛋白（本研宄命名为和。系统发育和生物信息学分析显示、和只含有一个结构域，且在个基因型虫株内保守一致。为揭示弓形虫蛋白功能及其作用机制，本研究选择克隆了与哺乳动物同源性最高的对其生物学特性与展开比较

5、研究，并探索弓形虫感染诱导的宿主变化及其机制。本研究首先制备了鼠抗血清，以之进行鉴定显示分子量约不与细胞、和发生交叉反应。间接免疫荧光证实在个基因型虫株内均有表达且定位于虫体细胞核，当虫体释放到胞外，则转位分布于虫体细胞质中。凝胶迁移实验表明可以识别绑定结构特异的十字型原核表达的可刺激巨噬细胞产生与水平相当的其绑定的￡⑶基因组片段可发挥协同作用。为揭示体生长发育的作用，本研宂构建了过表达和基因突变虫株。结果表明过表达致使虫体胞内增殖减慢，对小鼠的毒力减弱；而缺失功能结构域虫株无明显的表型改变。定量检测发现过表达导致、

6、、、、等系列基因转录水平明显上升，在突变虫株内相应基因的转录变化不明显，而同家族蛋白转录水平却有所上升。染色质免疫共沉淀（试验结果显示可以绑定、和等基因的启动子推测其可能参与转录复合体的形成而调控基因的转录。为探讨宿主在弓形虫感染诱导的炎症反应中的作用，本研宄对弓形虫感染过程中宿主细胞的转录、表达以及分泌进行了检测。结果显示弓形虫感染处理的细胞和小鼠后，引起感染细胞转录水平先上升后下降。弓形虫感染可诱导巨噬细胞释放，特异性阻断试验显示其部分依赖于途径。弓形虫感染引起宿主的释放对弓形虫病的发展，尤其是对慢性感染的脑炎可

7、能有重要影响，具体作用及其机制尚需更深入的研究。关键词：高迁移率族蛋白，龚地弓形虫，细胞核因子，转录调控，毒力，炎症AbstractHighmobilitygroupbox1(HMGB1)isanuclearfactorthatusuallybindsDNAandmodulatesgeneexpressioninmulticellularorganisms.Itplaysvarietyroleswhileitreleasedtotheextracellularmedia,suchasproinflammatoryan

8、dimmuneregulatory,throughinteractedwithdifferentreceptorsonthecellsurface,andblockingtheHMGB1secrectionpathwayorneutralizationoftheextracellularHMGB1havebeenselectedasthetar