高迁移率族蛋白b1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究

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1、分类号：Ｒ６单位代码：10752密级：公开学号：2010362宁夏医科大学硕士专业学位论文高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究TheeffectofHMGB1oninvasiveandmigrationabilitytohepatomacellandthepreliminarystudyonitsmechanism学位申请人：王超指导教师：李昭宇教授申请学位门类级别：医学专业名称：外科学研究方向：肝癌所在学院：临床学院论文完成日期：二零一三年三月宁夏医科大学研究生部NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaste

2、r’sSpecializedDegreeTheeffectofHMGB1oninvasiveandmigrationabilitytohepatomacellandthepreliminarystudyonitsmechanismStudent’sName:WangChaoSupervisor：LiZhaoyuSubjectCategory:MedicialScienceMajor:SurgerySpecialty:LivercancerSchool:ClinicalschoolCompletionDate:Mar.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是

3、个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和

4、汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论中文摘要高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究摘要目的原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。关于HMGB1与肝细胞癌关系的研究也已开展。有研究表明HMGB1在胃癌、食管癌、胰腺癌、结肠癌中表达增高，但具体作用机制尚不明确。本实验研究，我们通过检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织中HMGB1的表达情况，并使用RNA干扰技术合成针对高迁移率

5、族蛋白B1（HMGB1）的siRNA，观察其对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响，并对其意义及机制进行探讨分析。方法（1）收集取病理证实的肝细胞癌组织标本10例，另选取经病理证实为肝细胞癌癌旁的正常肝组织10例作为对照。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Westernblot）检测肝癌与癌旁组织、人肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株L-02中HMGB1表达的差异；（2）RNA干扰技术合成3对特异性针对HMGB1的HMGB1-siRNA并转染HepG2，设置空白组与对照组，并使用Westernbllot技术检测沉默效果；（3）选择沉默效果最好的HMGB1-siRNA

6、，应用跨膜迁移实验、平面迁移实验检测细胞侵袭迁移能力的变化；（4）通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Westernblot）方法进一步分别测定HMGB1-siRNA转染进入HepG2后的MMP2、MMP9、ICAM1和TIMP2的mRNA和蛋白表达水平。结果实验结果表明肝癌组织较癌旁组织HMGB1表达水平明显增加，肝癌细胞株HepG2较正常肝细胞株L-02中HMGB1也明显增高（均P<0.05）；HMGB1-siRNA转染后可明显降低HepG2中HMGB1的表达，其中HMGB1-siRNA-1的沉默效率最高（P<0.05），用40nM的HMGB1-siRNA-1对HM

7、GB1的抑制效率在24、48、72h均达80%以上，96h后明显下降（均P<0.05）；用40nM的HMGB1-siRNA-1转染HepG2，24h后HepG2细胞迁移和侵袭能力下降（均P<0.05）。转染后MMP2、MMP9、ICAM1的mRNA表达明显下调，而TIMP2的mRAN表达明显上调（均P<0.05）。结论HMGB1在肝癌中高表达，可促进肝癌细胞的侵袭迁移，通过HMGB1-siRNA抑宁夏医科大学硕士研究生学位论中文摘要