通络糖泰对高糖培养的SD大鼠施旺细胞分化的影响及高糖缺氧条件下SD大鼠背根神经节神经元培养方法研究

《通络糖泰对高糖培养的SD大鼠施旺细胞分化的影响及高糖缺氧条件下SD大鼠背根神经节神经元培养方法研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、成都中医药大学ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine（基础医学院）二0一八届硕士研究生学位论文通络糖泰对高糖培养的SD大鼠施旺细胞分化的影响及高糖缺氧条件下SD大鼠背根神经节神经元培养方法研究EffectofTongluoTangtaiPrescriptiononDifferentiationofSCsinSDRatsUnderHighGlucoseCultureandResearchonCultureMethodofDRGninSDRatsU

2、nderHighGlucoseandHypoxiaConditions研究生姓名：辛成花指导教师：杜联教授学科专业：中西医结合基础二0一八年五月学位论文通络糖泰对高糖培养的SD大鼠施旺细胞分化的影响及高糖缺氧条件下SD大鼠背根神经节神经元培养方法研究EffectofTongluoTangtaiPrescriptiononDifferentiationofSCsinSDRatsUnderHighGlucoseCultureandResearchonCultureMethodofDRGninSDRa

3、tsUnderHighGlucoseandHypoxiaConditions辛成花指导教师姓名：杜联教授申请学位级别：硕士专业名称：中西医结合基础论文提交时间：2018年4月论文答辩时间：2018年5月二0一八年五月成都中医药大学2018届硕士学位论文摘要目的：通过观察通络糖泰方对高糖培养的SD大鼠施旺细胞（SchwannCells，SCs）成髓化的影响，从而证实通络糖泰可促进髓鞘调控因子的表达，改善糖尿病周围神经病变的发生发展；同时研究高糖缺氧对背根神经节神经元（dorsalrootgangl

4、ionneuron，DRGn）培养的最适条件，为糖尿病周围神经病变（DiabeticperipheralneuropathyDPN）的基础研究提供一定的科学理论依据。方法：1.选新生3-5d的SD大鼠，取坐骨神经，原代培养SCs,取第三代生长良好的SCs作为研究对象。用50mM高糖培养72h,建立DPNSCs模型。加入通络糖泰含药血清干预，在前期研究的基础上，通过WesternBlot法检测髓鞘调控因子P0在高糖条件下的SCs24h、48h、72h三个时间点的表达。2.选新生3d的SD大鼠，取背

5、根神经节，原代培养背根神经节神经元，取生长良好的神经元作为研究对象。通过光镜下观察细胞形态、ROS表达法及CCK-8法检测0、6h、24h时间点不同浓度高糖、缺氧对DRGn的诱导损伤，以期建立DPN背根神经节神经元模型。结果：1.S-100免疫荧光鉴定SCs的纯度达90%以上，可进行下一步实验。Westernblot检测提示，与对照组相比，培养24h,高糖组SCsP0蛋白表达值，差异无统计学意义（P＞0.05）；培养48h、72h,高糖组SCsP0蛋白表达值降低，且随时间的延长其降低程度更明显，

6、差异有统计学意义（P＜0.05）、（P＜0.01）；与高糖组相比，培养24h,2.5%、5%、10%、20%浓度通络糖泰血清干预高糖组SCsP0蛋白表达值，差异无统计学意义（P＞0.05）：培养48h、72h,10%浓度通络糖泰血清干预后SCsP0蛋白表达值均升高，且随时间的延长其升高程度更明显，差异有统计学意义（P＜0.05）、（P＜0.01）；且5%与20%浓度通络糖泰血清干预后SCsP0蛋白表达仅在72h时间点升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；2.5%浓度通络糖泰血清干预高糖组SCs

7、P0蛋白表达值，在各个时间点差异均无统计学意义（P＞0.05）。2.得到生长良好的DRGn，β-tubulinⅢ免疫荧光鉴定的细胞纯度达到90%以上。细胞形态、ROS表达及CCK-8法摸索最佳高糖浓度为50mM，缺氧浓度为300uM及高糖缺氧浓度为50mM+300uM,培养最佳时段为24h。1成都中医药大学2018届硕士学位论文结论：1.采用植块法结合双酶消化法共同培养新生鼠SCs，阿糖胞苷+差速贴壁法进行纯化，S-100免疫荧光鉴定SCs的纯度达90%以上，原代培养方案可行。2.高糖可抑制SC

8、s髓鞘调控因子P0蛋白的表达。3.通络糖泰可改善高糖对髓鞘调控因子P0蛋白表达的抑制作用，上调其表达，促进SCs成髓化，进而改善DPN髓鞘再生障碍的病理特征，防治DPN。4.采用改良的双酶消化法培养新生鼠DRGn，阿糖胞苷进行纯化，β-tubulinⅢ免疫荧光鉴定的细胞纯度达到90%以上，成功培养DRGn。5.50mM高糖、300uMCOCL2以及50mM高糖+300uMCOCL2可引起DRGn表型发生病理性变化、ROS出现表达及其活性被抑制，故此浓度的高糖、缺氧可作为诱导DPNDRGn模型。关