纳豆激酶体内药效和毒性研究

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1、分类号：单位代码：10140密级：公开学号：4031532008硕士学位论文中文题目:纳豆激酶体内药效和毒性研究英文题目:Studyonpharmacodynamicsandtoxicityofnattokinaseinvivo论文作者：王天琦指导教师：陈立江教授专业：药物化学完成时间：二○一八年五月申请辽宁大学硕士学位论文纳豆激酶的体内药效和毒性研究Studyonpharmacodynamicsandtoxicityofnattokinaseinvivo作者：王天琦指导教师：陈立江教授专业：药物化学答辩日期：2018年5月24日二○一八年五月·中国沈阳辽宁大学学位论文原创性声明本人郑

2、重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的。论文中取得的研究成果除加以标注的内容外，不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中进行了标注，并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权辽宁大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等

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4、，药效时间长，而且安全性好，为解决目前抗血栓类药物的口服性差，价格昂贵、并发症多等问题带来更多希望。本文通过应用实验室分离到的高产纳豆激酶菌株（BacillussubtilisnattoLNUB236）经过发酵培养，以发酵液为原料，采用硫酸铵沉淀纳豆激酶，将离心后的沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，得到的纳豆激酶粗酶液，进行两次SephadexG-75凝胶层析，收集到的纳豆激酶活性组分经过冷冻干燥得到冻干粉，并定量将冻干粉装入大鼠专用肠溶胶囊，以口服纳豆激酶肠溶胶囊的给药方式来评价纳豆激酶在体内的药效作用、体内急性毒性和长期毒性，为纳豆激酶的临床应用和产品开发提供相应的理论基础。纳豆激酶抗血栓的

5、作用评价是通过构建SD大鼠体内血栓模型以及对小鼠尾部出血时间的影响进行评价。体内药效表明，FeCl3诱导的大鼠颈动脉血栓实验中，与对照组相比，纳豆激酶5000IU/kg、10000IU/kg、15000IU/kg剂量组均能够有效抑制大鼠颈动脉血栓的形成（P＜0.0001），且具有剂量依赖性。在小鼠尾部出血实验中，与对照组相比，5000IU/kg、10000IU/kg、15000IU/kg剂量组均能显著延长出血时间（P＜0.0001），且随着给药剂量的增加出血时间更长（P＜0.0001），具有剂量依赖性。观察纳豆激酶对SD大鼠的急性毒性和长期毒性，为临床用药安全提供参考。纳豆激酶急性毒性

6、实验中，一次给药5000mg/kg，并连续观察14天，记录毒性反应和死亡情况。急性毒性实验中无毒性反应和死亡发生，实验结果表明纳豆激酶的LD50＞5000mg/kg，无急性中毒的危险性。在长期毒性实验中，观察大鼠重复28天给予纳豆激酶毒性反应，将大鼠随机分成4组，分别为对照组、纳豆激酶120mg/kg、360mg/kg、1000mg/kg给药剂量组，重复给药28天，试验期间每天观察大鼠的外观体征、行为活动，并在实验结束采集血样进行血液学、血液生化学、凝血指标及病理组织学检查。纳豆激酶重复给药28天，给药期间大鼠生长发育良好，行为活动正常，各项指标检测均未发现异常，本实验中未发现与纳豆激

7、酶毒性相关的异常改变，纳豆激酶经口服给药28天对大鼠无明显毒性。纳豆激酶重复I摘要给药90天的毒性实验中，大鼠随机分为4组，分别为对照组、纳豆激酶120mg/kg、360mg/kg、1000mg/kg给药剂量组，重复给药90天，给药期间观察大鼠的一般状态，给药结束后大鼠分别进行血液学、血液生化学、凝血指标和病理组织检查。实验期间各给药组大鼠的外观体征，行为活动，粪便等均正常，各项指标检查均未发现异常。本实验条件下，未发现纳豆激酶毒性引起的异常改