！纳豆激酶研究进展

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sei．2011，39(7)：3821—3823，3830责任编辑乔利利责任校对马君叶纳豆激酶研究进展敬俊锋，陈斌，李莹，何正波(重庆师范大学生命科学学院，重庆高校生物活性物质工程研究中心，重庆高校动物生物学重点实验室，重庆400047)摘要对纳豆激酶的理化性质、基因与蛋白结构、纳豆激酶基因的克隆与表达及体外溶栓活性测定方面的研究进展进行了综述，并对纳豆激酶的发展前景进行了展望。关键词纳豆激酶；结构；克隆表达；活性测定；展望中图分类号S183文献标识码A文章编号0517—6611(2011)07-03821一o

2、3CurrentResearchProgressofNattokinaseJINGJun-fengetal(InstituteofEntomologyandMolecularBiology，EngineeringResearchCenterofBioactiveSubstancesofChongqing，EngineeringResearchCenterofBioactiveSubstanceBiotechnologyofEducationMinistry，ChongqingNormalUniversity，Chongqing400047)AbstractThe

3、nattokinasenature，genesandproteinstructure，thecloningandexpressionofnattokinaseandthedeterminationofvitrofi·brinolyticactivitvarediscussedinthisPaDer．AndthedevelopmentprospeetofnattokinaseiSexpiredintheend．KeywordsNattokinase：Structure；Cloneexpression；Fibrinolyticactivity；Prospective

4、心脑血管疾病是人类健康和生命的最大威胁之一，目前FP、Neguvon却能完全抑制其活性。NK最敏感的底物是采用溶栓酶治疗心脑血管疾病是有效途径之一。纳豆激酶血浆纤溶酶底物H—D-Val—Leu—Lys—pNA(S-2251)⋯，发生作(Nattokinase，NK)是一种由纳豆菌或纳豆枯草杆菌产生的碱用时，首选酶切位点在Leul5一Tyrl6，其次在Ser9一Hisl0，在性丝氨酸蛋白酶。日本的Sumi等⋯于1987年首次从日本Gln4一His5及His5一Leu6也有微弱的水解活性，但纳豆激酶对传统食品纳豆中发现并命名。纳豆激酶具有很强的纤溶活氧化型胰岛素B链

5、C端Tyrl6～Ala30的肽段却无任何酶切性，能直接作用于纤溶蛋白，也能激活体内纤溶酶原。与其特性j。因此，使用纳豆激酶作为溶栓药物，可避免其他溶他溶栓类药物相比，NK具有安全性好、成本低、纤溶活性强、栓酶类引起的出血反应。可口服、作用时间长等优点，正作为一个开发预防和治疗血2纳豆激酶的基因与蛋白质结构栓药物的研究热点，有望被开发为新一代的口服抗血栓药物1992年Nakamura等采用鸟枪法首次克隆并分析了用于血栓性疾病的预防和治疗。国内外许多学者对纳NK包括调控序列在内的全基因序列。该基因全长1473bp，豆激酶进行了研究，在纳豆激酶的理化特性和基因工程方面

6、以GTG为起始密码子，随后是由1143bp组成的开放阅读框都取得了很大进展。基于此，笔者就纳豆激酶的理化性质、架。其结构基因的3末端是3个连续的终止密码子TAA、基因与蛋白结构、克隆表达研究、体外溶栓活性试验及发展TAG和TAA，转录终止序列为：TAAAAAGAAGCAGGTYC-前景等方面进行了综述，旨在为进一步研究纳豆激酶基因工CTCCATACCTGCTFCTITFA，位于成熟蛋白区域C端下游7程奠定基础。bp处，该段终止序列可形成茎环结构，即P因子非依赖性终1理化性质止序列。起始密码子上游一17～11bp位点为核糖体结合位NK无臭味，干粉呈白色或淡黄色，在

7、280nnl波长处有点s．D序列：AAAGGAG。S-D序列上游是A／T含量高达吸收峰。由基因DNA序列推出其氨基酸序列，算出该酶的72％的转录调控区域，在核糖体同mRNA结合过程中起重要准确分子量为27．728×10，PI值为8．6±0．3。在室温pH值作用。5～11范围内活性稳定，最适酶反应pH值为8。低温对其活许多研究者根据NK基因的DNA序列推出其氨基性影响不大，超过50℃活性逐渐丧失，超过60℃活性迅速酸序列的l级结构，纯化的纳豆激酶在SDS-PAGE凝胶上，失去，最适反应温度为45℃。有机物如甘油、丙二醇、牛只显示出1条带，说明纳豆激酶是一单链多肽酶

8、。也有研究血清蛋白、明胶