纳豆激酶的研究进展

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1、维普资讯http://www.cqvip.com2008年第43卷第7期生物学通报5纳豆激酶的研究进展缪仕伟别、智杰(北京理T大学生命科学与技术学院北京100081)摘要纳豆激酶是一种由纳豆芽孢杆菌产生的具有强溶纤作用的碱性丝氨酸蛋白酶，具有安全性好、半衰期长、口服有效等优点。就纳豆激酶的结构、理化性质、功能、溶栓机制、酶活性测定、分离纯化以及纳豆激酶的应用现状及发展前景等方面进行了综述。关键词纳豆激酶溶栓药物酶活性测定中国图书分类号：Q55文献标识码：A血栓和栓塞性疾病严重威胁着人类的生命与草杆菌蛋

2、白酶基因比较发现，NK基因编码了一段健康，其发病率和死亡率居各种疾病之首。目前全有29个氨基酸残基的信号肽和一段有77个氨基世界血栓患者达1500万，潜在的溶栓剂市场达酸残基的蛋白肽，位于成熟NK(MW271700)的27520亿美元。个氨基酸之前。纳豆激酶(nattokinase简称NK1是一种在纳豆1．2纳豆激酶的蛋白质结构纯化的纳豆激酶发酵过程中由纳豆菌(Baciuusnatto)或纳豆枯草杆在SDS—PAGE凝胶上，无论还原剂巯基乙醇是否菌(B．subtillsnatto)产生的丝氨酸蛋白酶。

3、纳豆激存在，均只显示出一条带。这说明纳豆激酶是一单酶具有很强的纤溶活性，不但能直接作用于纤溶链多肽酶。不同测定方法测得的纳豆激酶的分子蛋白，而且还能激活体内纤溶酶原，从而增加内源量从27．3×10635．0x10不等，但根据其基因的性纤溶酶的量与作用。由于NK具有安全性好、成DNA序列推测氨基酸的一级序列，得出该酶是由本低、作用迅速、经口服后可迅速人血，纤溶活性275个氨基酸残基组成的单链多肽，无二硫键，准强，可由细菌发酵生产、作用时间长等优点．有望确分子量应为27．728x10。纳豆激酶的序列中含被

4、开发为新一代的口服抗血栓药物用于血栓性疾有8个赖氨酸残基，没有半胱氨酸残基，内肽酶病的预防和治疗(宁树成等，2006；迟东升等，2007)。可将其水解成为9个小肽，成熟肽组成与氨基酸笔者就纳豆激酶的结构、理化性质、生物学功序列测定相符。纳豆激酶是一种丝氨酸蛋白酶，其能、溶栓机制、酶活性测定、分离纯化及其应用现活性中心为Asp32、His64和Ser221，与底物结合状及发展前景等方面进行了综述。部位在Ser125、Leu126、Gly127处。等电点pH为1纳豆激酶的结构8．6±0．3。纳豆激酶的信号

5、肽包含1个带3个正电1．1纳豆激酶的核苷酸序列NAKAMURA等利荷的亲水N端以及一段不带电的疏水残基序列．用鸟枪法首先在E．colj宿主一载体系统中克隆得切割位点位于Ala—Gln—Ala保守序列之后。到了NK基因，aprN。该基因长1473bp，以GTG2纳豆激酶的理化特性为起始密码子，紧接着是一个含有1143个核苷2．1分子量和等电点由分离纯化的纳豆激酶酸的开放读框(ORF)，以TAA，TAG，TAA为终止基因DNA序列推出其氨基酸序列，根据该顺序计密码子，转录终止序列为：TAAAAAGAAGC

6、AGGT—算出该酶的准确分子量为27．728x10，远小于尿TCCTCCAT—ACCTGC1TrC删A，位于成熟蛋白区激酶的分子量54．0x10，用Svunsson柱型电泳法域C端下游7bp处，此段终止序列可形成茎环结等电聚焦测得NK具有对称的单一的纤溶酶峰．构，即P因子非依赖性终止序列。上游一17bp～11bp其PI值为8．6+0．3。位点为核糖体结合位点S—D序列：AAAGGAG。其2．2理化性质NK为白色粉末状、无臭味，在在核糖体同mRNA结合过程中起着重要的作用，pH6．0～12．0范围内比较

7、稳定，pH低于5．0时，贝8把从DNA序列推导出来的氨基酸序列同其他枯很不稳定。40℃保温30min，酶活无变化，但温度通讯作者维普资讯http://www.cqvip.com6生物学通报2008年第43卷第7期超过50℃时，活力逐渐丧失，超过60℃时则因蛋性提高；3)血浆中t—PA量有所增加。由于NK的白变性而迅速失活。若添加明胶，可使其热稳定性安全性。稳定性和良好的溶解血栓的作用，其有可提高5倍以上。研究表明，冻融对NK活性影响能作为口服试剂用于血栓的预防和治疗。不大，反复冻融5个循环，酶活性仍保

8、持95％以4纳豆激酶的溶酸机制上。若添加明胶。可使其热稳定性提高5倍以上。一般的溶栓药物，如链激酶、尿激酶、t—PA等当NK与煮沸过的小麦或大米提取液、肉汤以及都是纤溶酶原激活剂型．它们都需要通过激活靶血清蛋白和胃粘液蛋白混合后，NK的稳定性显酶——纤维蛋白溶酶原转变为纤维蛋白溶酶，再著提高，甚至在酸性条件下，仍保持有酶活性，这与纤维蛋白结合，发挥溶栓作用。而它们本身并不说明纳豆激酶能在胃环境中保持一定的活性，可能直接作用于纤维蛋白。而纳豆激酶一个很独特