利用cd11c-dtr小鼠研究肠道巨噬细胞在dss诱导的急性结肠炎中的作用

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1、授予单位代码１００８９学号或申请号１３７５８巧蛛店钟ＡＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ硕±学位论文在职科学学位利用ＣＤｌｃ－ＤＴＲ小鼠研ＤＳＳ诱导的ｌ究肠道巨隧细胞在急性结肠炎中的作用学位申请人；王充导师：孙奕教授专业：免疫学二级学院：武警后勤学院２０１５年１０月巧化医科大学学位论文使用授权及知巧产权巧属承诺本学位论文在导师或指导小组。本）的指导下，由本人独立完成（。学位论文研究所获得的硏究成果，其知识产权归河北医科大学所有河北医科大

2、学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学一位论文主要内容相关的论文，第署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产极均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名导师签章：与二级学院领导盖章：／ｆ２＾年／月日河化医科大学硏究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究了作及取得的研究成果，除了文中持别加Ｗ标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研巧成果，，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写文责自负。研究生签名

3、：才；导师签章■夕年＂月／Ｚ日目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写………………………………………………………………………8研究论文利用CD11c-DTR小鼠研究肠道巨噬细胞在DSS诱导的急性结肠炎中的作用前言……………………………………………………………………9材料与方法……………………………………………………………10结果……………………………………………………………………19附图……………………………………

4、………………………………23附表……………………………………………………………………30讨论……………………………………………………………………31结论……………………………………………………………………32参考文献………………………………………………………………33综述肠道树突状细胞亚群分类进展………………………........………35致谢…………………………………………………………........…………45个人简历…………………………………………………........……………46中文摘要利用CD11c-DTR小鼠研

5、究肠道巨噬细胞在DSS诱导的急性结肠炎中的作用摘要目的：溃疡性结肠炎（UC）是一种病因和发病机理尚不十分清楚的慢性肠道炎症性疾病。研究发现活动性UC患者的大肠炎症中巨噬细胞的数量明显增，巨噬细胞还分泌大量的细胞因子及生物活性物质，在炎症反应中发挥重要的作用。给CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT（白喉毒素），可以完全清除肠道巨噬细胞和树突状细胞，而巨噬细胞和树突状细胞在肠道重新发育回来存在时间窗口期。DT注射后3天后树突状细胞优先发育回来，两周后巨噬细胞才能在肠道中发育回来。利用这种方法我们可以在体内研究巨噬细胞缺失对DSS（

6、葡聚糖硫酸钠）诱导的急性结肠炎的发生发展产生怎样的作用。方法：1流式检测CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT后巨噬细胞和树突状细胞在肠道中发育回归窗口期流式细胞术检测CD11c-DTR小鼠注射DT后不同时间点（1d、3d、1w、2w）大肠固有层巨噬细胞（IA/IE+F4/80+）和树突状细胞（CD11c+CD11b+）的数量和比例的变化情况。2建立C57BL/6小鼠DSS诱导的急性结肠炎模型据Cooper等的方法，建立急性DSS诱导的小鼠结肠炎模型：将分子量为5000的DSS溶于蒸馏水，配制成5%的DSS溶液，使C57BL/6

7、小鼠自由饮用7天，建立小鼠急性结肠炎模型。3检测巨噬细胞在DSS诱导的C57BL/6小鼠急性结肠炎中的作用流式检测DSS诱导的C57BL/6小鼠急性结肠炎中大肠固有层巨噬细胞（IA/IE+F4/80+）比例和数量的变化。免疫组化检测DSS诱导的急性结肠炎中大肠固有层巨噬细胞（IA/IE+F4/80+）数量的变化。采用Real-TimePCR、ELISA方法，检测DSS诱导的急性结肠炎直肠组织相关细胞因子分泌情况。4检测CD11c-DTR小鼠DT窗口期（巨噬细胞缺失）DSS诱导急1中文摘要性结肠炎免疫病理变化用5%的DSS溶液

8、诱导窗口期小鼠（CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT后第7~14d）建立小鼠急性结肠炎模型。流式细胞术、HE染色观察在肠道巨噬细胞缺失的情况下DSS诱导急性结肠炎发生发展情况。用Real-TimePCR、ELISA为辅助手段，检测在肠道巨噬细胞缺失的情况下DSS诱导的急性结肠炎直肠组织相关细