干扰素诱导蛋白204在小鼠DSS诱发结肠炎中的作用

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1、分类号：Ｓ８５２．４１０１８３单位代码：研究生学号：２０１５８５２０２１密级：公开吉林大学硕士学位论文学术学位（）干扰素诱导蛋白２０４在小鼠ＤＳＳ诱发结肠炎中的作用－ＴｈｅＲｏｎｄｕｃ－ｌｅｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎｉｉｂｌｅｒｏｔｅｎ２０４ｎＤＳＳｕｃｅｄｐｉｉｉｎｄＣｏｌｉｔｉｓｏｆＭｉｃｅ作者姓名：秦晓霞专业：预防兽医学研究方向：微生物与免疫学指导教师：杨勇军教授培养单位：动物医学学院２０１８年６月未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和

2、个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则应承担侵权的法律责任。，吉林大学硕士学位论文原创性声明，本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下。独立进行研宄工作所取得的成果除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名曰期：ｗ年月／曰／ｇ〈

3、／干扰素诱导蛋白204在小鼠DSS诱发结肠炎中的作用TheRoleofInterferon-inducibleprotein204inDSS-inducedColitisofMice作者姓名：秦晓霞专业名称：预防兽医学指导教师：杨勇军教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年6月2日中文摘要干扰素诱导蛋白204在小鼠DSS诱发结肠炎中的作用干扰素诱导蛋白204（IFI204）是一种胞内DNA受体，能够识别DNA病毒和胞内菌。目前已知IFI204识别DNA后主要启动两种天然免疫信号：诱导干扰素产生和引起炎性体活化。肠炎和肠癌等肠道疾病是严重威胁人类以及

4、多种动物健康的重要疾病之一，IFI204在肠道疾病中的作用仍不清楚。本论文以葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结肠炎为研究模型，探讨IFI204对肠炎发生的调节作用。研究发现IFI204主要通过调节肠道菌群的构成发挥抗结肠炎的作用，并分析疣微菌门疣微菌属Akkermansiamuciniphilia(A.muciniphilia)对结肠炎发生具有保护作用。首先，通过荧光定量PCR的方法对IFI204在小鼠各个组织中的表达情况进行检测，结果发现IFI204在小肠、盲肠以及结肠中均有表达。随后，通过DSS诱导肠炎模型，分析IFI204在结肠炎中的作用。结果发

5、现，IFI204基因缺失小鼠对DSS诱导的肠炎更为易感。主要表现为：IFI204基因缺失后，小鼠存活率显著降低；从DSS诱导肠炎的第5天开始，小鼠体重减轻更为明显；IFI204基因缺失小鼠结肠组织肠黏膜下层水肿严重，肠黏膜大面积溃疡，结构破坏严重，病理损伤更为严重。通过免疫组化的方法对构成黏液层的主要黏蛋白mucin2的表达情况、黏液层的厚度、分泌黏蛋白的杯状细胞数量进行检测。结果发现，空白组的WT小鼠和IFI204基因缺失小鼠mucin2的表达无明显差异，黏液层厚度相似，杯状细胞数量相近。通过AB和PAS染色对黏蛋白的表达量及性质进行分析发现，与W

6、T小鼠相比，IFI204基因缺失小鼠总的黏蛋白表达量无显著差异，然而，对维持黏液层稳定性起重要作用的酸性黏蛋白显著减少。以上结果说明IFI204基因缺失小鼠对DSS诱导肠炎易感性增加，且对肠炎易感性增加可能源于酸性黏蛋白表达减少所致。黏蛋白能够被肠道微生物降解，并为微生物的成长提供能量，影响微生物的组成，同时肠道微生物菌群也能够影响黏蛋白的表达及性质。因此，我们进一步I分析IFI204对黏蛋白性质的影响，以及对肠炎易感性的差异是否由肠道微生物调节。对两种基因型小鼠粪便基因组DNA进行16srRNA测序分析发现，两种基因型小鼠菌群不同，分别位于不同的群

7、落内。厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门细菌总共占整个肠道微生物菌群的98%以上。对这三个门的细菌进行PCR分析统计发现，与WT小鼠相比，IFI204基因缺失小鼠肠道微生物中拟杆菌门和变形菌门存在显著差异，而厚壁菌门无明显差异。为了验证WT与IFI204-/-小鼠之间的差异是否由肠道菌群的改变引起的，将两种基因型的小鼠共同饲养或交叉抚育，使肠道菌群趋于一致。然后通过DSS诱导肠炎，分析菌群差异是否影响IFI204基因缺失小鼠对肠炎的易感性。结果发现，共同饲养或交叉抚育后的两种基因型小鼠对DSS诱导肠炎的易感性趋于一致。主要体现在DSS诱导肠炎后，共同饲养或

8、交叉抚育后的两种基因型小鼠存活率一致，体重减轻一致，临床病理学评分一致；DSS诱导肠炎第7天，结肠组织病理损