四逆汤对AOM-DSS诱导小鼠结肠癌的作用及对小鼠肠道菌群的影响

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1、分类号：S859.7单位代码：10183研究生学号：2015882014密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）四逆汤对AOM-DSS诱导小鼠结肠癌的作用及对小鼠肠道菌群的影响EffectofSiniTangonAOM-DSS-InducedColorectalCancerandGutMicrobiotainMice作者姓名：张笑笛专业：生物化学与分子生物学研究方向：生物制药指导教师：宋宇教授培养单位：动物科学学院2018年6月四逆汤对AOM-DSS诱导小鼠结肠癌的作用及对小鼠肠道菌群的影响EffectofSiniTangonAOM-DSS-InducedColorectal

2、CancerandGutMicrobiotainMice作者姓名：张笑笛专业名称：生物化学与分子生物学指导教师：宋宇教授学位类别：理学硕士答辩日期：2018年6月4日中文摘要四逆汤对AOM-DSS诱导小鼠结肠癌的作用及对小鼠肠道菌群的影响结直肠癌（Colorectalcancer，CRC）是全球最常见的恶性肿瘤之一，尤其高发于西方国家，其致死率排名世界前三。CRC分为散发性结肠癌和结肠炎相关癌症，其诱发因素包括环境、饮食、基因易感、肠粘膜损伤及肠道菌群失调等。近年来，随着人们对结肠癌的关注度越来越高，中医药在结肠癌的防治过程中也发挥着越来越重要的作用。四逆汤是张仲景《伤寒论》中

3、的经典名方，主要由附子、干姜、甘草三味药组成。研究表明，四逆汤具有抗肿瘤、抗休克、抗动脉粥样硬化、保护肠粘膜、免疫调节等多种药理作用。在本研究中，我们以AOM-DSS法诱导建立小鼠结肠癌模型，考察四逆汤对小鼠结肠癌的作用，并结合其对小鼠肠道菌群的影响，进一步探索其可能的作用机制。在造模过程中，每天监测小鼠体重变化情况，并于造模结束后，统计小鼠实验前后体重增长百分比；取得结肠，拍照，做H.E.染色病理组织检测，统计结肠单位重量，以判断四逆汤对结肠癌小鼠的药效学作用。结果显示，四逆汤能够在一定程度上增加结肠癌小鼠体重，改善小鼠生存质量，降低结肠单位重量；从结肠表型观察可见四逆汤治疗

4、后的结肠肿瘤数量明显减少、体积变小，从病理学角度可见治疗组结肠肿瘤恶性程度得到改善，说明四逆汤能够明显改善AOM-DSS诱导的小鼠结肠癌。因此，我们又从细胞因子、免疫、肠屏障和肠道菌群等角度进一步探索四逆汤抗结肠癌的作用机制。以ELISA法检测细胞因子表达情况，实时荧光定量RT-PCR法检测COX-2和MUC2的表达，免疫组化法检测CD4、CD8、Occludin的表达。结果表明，四逆汤能够抑制小鼠结肠癌组织促炎因子IL-6、IL-17、TNF-α和IFN-γ的分泌，下调COX-2、MUC2的表达，增加++CD4、CD8T淋巴细胞的数量，诱导紧密连接蛋白Occludin在结肠上

5、皮细胞和黏膜层的表达增加。此外，以16SV4区扩增子测序法检测小鼠粪便样本中肠道菌群的变化，实时荧光定量PCR法检测几种对结肠癌有重要意义的肠道细菌。结果发现，四逆汤能够改变结肠癌小鼠肠道菌群的组成结构，减少致病菌脆弱拟杆菌（Bacteroidesfragilis）和硫酸盐还原菌（Sulphate-reducingbacteria，SRB）的数量，增加有益菌乳杆菌（Lactobacillus）、凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulan）、I阿克曼氏菌（Akkermansiamuciniphila）和双歧杆菌（Bifidobacterium）的相对含量。综上所述，四逆汤可能

6、通过增强肠道免疫、抑制促炎因子分泌、下调结肠癌标志性基因、保护结肠粘膜屏障，并改变肠道菌群组成，减少致病菌、增加有益菌来发挥对小鼠结肠癌的改善作用。关键词：四逆汤；结肠癌；肠道菌群；免疫IIAbstractEffectofSiniTangonAOM-DSS-InducedColorectalCancerandGutMicrobiotainMiceColorectalcancer(CRC)isoneofthemostcommonmalignanttumorintheworld,especiallyinWesterncountries.Itsmortalityrateranksin

7、thetopthreeintheworld.CRCisdividedintosporadiccoloncancerandcolitis-relatedcancers.Thepredisposingfactorsincludeenvironment,diet,geneticsusceptibility,intestinalmucosaldamage,andintestinaldysbacteriosis.Inrecentyears,ascolorectalcancerhasbecomemore