tgf-β1和egfp体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验研究

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1、12目录目录………………………………………………………………………3TGF-β1和EGFP体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验研究（论文标题）…………………………………………………………………4中文摘要………………………………………………………………4英文标题…………………………………………………………………5ABSTRACT……………………………………………………………5英汉缩略词对照表………………………………………………………6前言……………………………………………………………………71材料与方法……………………………………

2、…………………101.1实验动物…………………………………………………………101.2主要实验试剂及材料……………………………………………101.3实验方法…………………………………………………………121.4统计学分析………………………………………………………192结果…………………………………………………………………203讨论………………………………………………………………244结论…………………………………………………………………30参考文献………………………………………………………………31综述（TGF-β1修复退变椎

3、间盘相关研究进展）……………………36参考文献………………………………………………………………41攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………44致谢……………………………………………………………………453TGF-β1和EGFP体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验研究摘要目的：通过电转化法介导转化生长因子β1（TGF-β1）和EGFP基因转染兔骨髓间充质干细胞（BMSCs），观察Ⅱ型胶原蛋白表达情况。方法：取3只1周龄清洁级健康新西兰大白兔，麻醉后处死，无菌条件下取出胫骨及股骨，暴露髓腔冲出骨髓，应用全骨髓细胞贴壁

4、培养法分离、培养出兔的BMSCs；流式细胞仪法检测细胞表型；将培养获得的BMSCs分3组：TGF-β1+EGFP共转染组，EGFP单独转染组，空白对照组。利用电转化技术将TGF-β1和EGFP对BMSCs进行转染，[1]荧光显微镜观察转染效果，继续培养至14d，应用免疫组化法和westernblot法分别检测Ⅱ型胶原表达情况。结果：成功分离并培养出BMSCs，经流式细胞仪鉴定其细胞表型CD90和CD44表达为阳性，CD31和CD45表达为阴性；成功转染TGF-β1至BMSCs后；通过免疫组化检测TGF-β1组细胞内(0.487

5、0±0.0181)Ⅱ型胶原有较强的表达，与EGFP组(0.0858±0.0097)及空白对照组（0.0805±0.0098）相比较有显著差异性（P<0.05)。westernblot检测TGF-β1组细胞内(0.3200±0.0067)Ⅱ型胶原有较强的表达，与EGFP组(0.2012±0.0074)及空白对照组（0.1964±0.0041）相比较有显著差异性（P<0.05)。结论：电转TGF-β1质粒至兔BMSCs，能促进Ⅱ型胶原高效表达，进而可以为进一步研究奠定基础。【关键词】：TGF-β1；骨髓间充质干细胞；电转染；Ⅱ型胶

6、原；4StudyofTGF-β1andEGFPelectroprationonrabbitbonemarrowderivedmesenchymalstemcellsinvitroABSTRACTObjective：ToobserveexpressionofcollagenⅡbytransfectinggrowthfactor-β1(TGF-β1)andEGFPgeneintorabbitbonemesenchymalstemcells(BMSCs)inelectropration.Method：3NewZealandwhite

7、rabbits（1weekold）wereused，theTibiaandfemurwereseparatedimmediatelyaftereuthanizedrabbitsunderstrictlyasepticconditions，exposedthecanalandBMSCswereculturedafterwashedbonemarrowanddigestioninvitro;Flowcytometrywasusedtodetectcellphenotype；BMSCsweredividedintothreegrou

8、ps:TGF-β1andEGFPelectroprationgroup，EGFPelectroprationgroup，blankcontrolgroup；TGF-β1andEGFPplasmidweretrasfectedintoBMSCsthroughelectropor