sirt6在溃疡性结肠炎发病机制中的作用研究

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1、京姑Ｔ和皆ｆ促博±研究生学位论文ｍｍＭ北京协和医学院研究生院学校化码：１００２３学号：Ｂ２０Ｕ００４１００博±学位论文ＳＩＲＴ６在溃瘍性结肠炎发病机制中的作用研究ＴｈｅＲｏｌｅｏｆＳＩＲＴ６虹化ｅＰａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＵｌｃｅｒａｔｉｖｅＣｏｌｉｔｉｓ所院：北京协和医院姓名：刘芳宜指导教师：钱家鸣教授谭小弟教授导师小组；杨红副教授（学科专业：内科学消化内科）研究方向：炎症性肠病完成日期：２０１５年

2、５月北京协和医学院中国医学科学院北京协和医院博壬研究生学位论文目录中文摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ．．．．．．．３缩略词表５前胃７一Ｓ１３第部分ＩＲＴ６在肠道炎症中的变他与作用研巧一Ｓ第节１ＲＴ６在小鼠肠道内表达定位及在ＤＳＳ诱导结肠炎小鼠模型和溃瘍性结肠炎患者肠道组织中表达变化的研究１３引言１３１４实验方法１７实验结果２４讨论３１３５第二节小鼠肠道上皮细胞内ＳＩＲＴ６在ＤＳ

3、Ｓ诱导结肠炎中作用的研究３７引言３７３８实验方法３９实验结果４７Ｘｉｉｔ５８结论６０第二部分结肠上皮细胞内ＳＩＲＴ６作用及机制的研究６１一Ｓ６第节ＩＲＴ６在结肠上皮细胞内功能的研究１引Ｂ６１６２实验方法６７实验賊８２＂讨ｉｆｅ９２结９７第二节ＳＩＲＴ６对肠道上皮细胞保护作用的机制初探９９引言９９揣測１００化京协和医学院中国医学科学院北京协和医院博去研究生学位论文实验方法１０１

4、实验结果１０３论１０８结论１１１全文总结１２５缺陷与不足１２７参考文献１２９１３９１致谢４９北京协和医学院中国医学科学院北京协和医院博壬研完生学位论文中文摘要背景与目的溃瘍性结肠炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｉｔｉｓ，ＵＣ）是炎症性肠病（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ旧０一ｂｏｗｅｌ＾ｓｅａｓｅ，）的种，１＾＞１易感人群反复发作性肠道炎症造成慢性肠黏膜损伤为主要特征。ＵＣ的发病原因和发病机理还不甚清楚。目前被广泛接受的观点认为

5、ＵＣ的发生发展伴随了肠上皮内免疫应答、黏膜屏障、代谢平衡等功能的改变或素＋一；乱。ＳＩＲＴ６是ＮＡＤ依赖性第ＩＩＩ类组蛋白去乙醜化酶家族中的个成员，可＾１通过（对组蛋白及非组蛋白的去乙酷化作用，调控基因转录和蛋白功能，参与调节体内多（１）种重要病理生理学过程，如糖代谢平衡、衰老、肿瘤和炎症等。本研究的目的是探究ＳＩＲＴ６在肠道内的表达丰度及表达定位（２）探究ＵＣ患者；肠熟膜活检组织及实验性结肠炎模型小鼠结肠内ＳＩＲＴ６表达是否发生改变；如果是，（３）探究ＳＩＲＴ６的表这改变

6、是否在肠道炎症及黏膜损伤中发挥了重要作用（４）探巧ＳＩＲＴ６在肠道；炎症及黏膜损伤中的作用机制。材料与方法ＷＤＳＳ诱导实验性结肠炎小鼠作为体内实验模型，正常成年小鼠结肠上皮（Ｙｏｕｎｇａｄｕｌｔｍｏｕｓｅｃｏｌｏｎ，ＹＡＭＣ）细胞系作为体外实验模型。运用Ｃｒｅ－ｌｏｘＰ系统通过小鼠杂交方法构建肠上皮内特异性ＳＩＲＴ６敲除动物模型。１７例正、常人肠道黏膜和１５例ＵＣ患者肠道黏膜活检标本收集于北京协和医院内镜中屯。利用分子克隆技术构建ＳＩＲＴ６过表达载体建立ＹＡＭＣ细胞

7、的ＳＩＲＴ６过表达模型。，利用小干扰ＲＮＡ技术实现ＹＡＭＣ细胞内ＳＩＲＴ６敲低模型的建立。此外，免疫巧光ＲＴ－ＰＣ民－ＭＡ染色被用确定ＳＩＲＴ６的表达定位，ｑ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＮＡｓｅｑ和ＳＤＥＬＩＳ等方法被用Ｗ检测人结肠熟膜活检标本、小鼠结肠组织、ＹＡＭＣ细胞或小鼠血浆内目的基因的表达水平。结果ＳＩＲＴ６在小鼠结肠中有较高水平的表达，且通过免疫巧光染色发现Ｓ化Ｔ６主要定位于近隐窝基底侧的肠道上皮细胞胞核内。连续７日ＤＳＳ诱导实验性结肠炎的发生发展过

8、程伴随着结肠内ＳＩＲＴ６蛋白表达的显著下调。ＳＩＲＴ６ｍＲＮＡ含量在ＵＣ患者肠黏膜活检组织中显著减少。麻上皮细胞特异性別ＲＴ６的敲除不影响小鼠，但是盈著增加了小鼠对ＤＳＳ诱导实验性结肠炎的易感性的生存生长和肠道发育。－体外实验中，我们发现ＩＦＮＹ和出〇２刺激能直接抑制ＹＡＭＣ细胞内ＳＩＲＴ６蛋白的表达，且这种抑制能为是剂量及时间依赖性的。ＳＩＲＴ６的敲低能够明显降低ＹＡＭＣＳＩＲＴ６对多种损伤及致死性刺激的抵抗能力，而的过表达能够显著扭转这种现象