pm2.5致人脐静脉内皮细胞凋亡及机制

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2、２０１５年５月參慕％鐘义戀，矣孝掌ＰＭ，ｓ致人挤静脉内皮细胞调亡及机制论文作者签名：妥冲兔、指导教师签名：节论文评阅人１：王安，副教授，硕导，中南大学评阅人２：曾明，副教授，硕导，中南大学评阅人３；答辩委员会主席；陈锋，教授，硕导，南华大学委员１；，教授，硕导，南华大学龙顶新委员２；张朝辉，副教授，硕导，南华大学委员３：陈丽丽，副教授，硕导，南华大学委员４：危当恒，教授，硕导，南华大学答辩日期：２０１５年５月１７日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在的研究工作及取的导师指导

3、下进行得。，除，研究成果尽我所知了论文中特别加标注和致谢的地方外论文中不包含，其他人己经发表或撰写过的研究成果也不包含为获得南华大学或其他单位的学。已位或证书而使用过与的同志对本研究所作的贡献均在论文的材料我巧同工作。了说明。本人完全意识到本声的法律结果由本人中作明确的明承担：作者签曰名年／月八身脅大学学位论文版权使用授权书南华学间在师指导下完成的学位本学位论文是本人在南华大攻读硕±学位期导论文。本论文研究成果有，本论文究容不得其它单位的的归南华大学所的研内Ｗ、目；。同意南华大学有关保，Ｐ名义发表本人留使用学位论文的规定学校有权保论文，允许学位论文被查

4、阅和借阅；学校可Ｗ公布学位论文的全部或部分留学位容，可ｙＡ采复、缩或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省内用印印。有关部入《中秀博硕±学位论文全口规定送交学位论文同意学校将论文加国优文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相。《关权益意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文录到中国学位论文同收全文数据，库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文解密。后适用该授权。签：抑／月日作者名／呼导：月日师签名脖０尸／PM2.5致人脐静脉内皮细胞凋亡及机制中文摘要目的：研究PM2.5对人脐静脉内皮细胞（HUVE

5、C）凋亡的影响及其潜在的机制，为评价PM2.5对人心血管疾病的潜在影响提供科学数据，为相关管理部门的科学决策提供理论依据。方法：PM2.5悬液浓度为：0.2、1、5、25μg/mL，PPS缓冲液为阴性对照。采用MTT法检测PM2.5对HUVEC细胞增殖的影响。Hoechst33258染色，荧光显微镜观察HUVEC细胞的凋亡小体。V-FITC-PI双染-流式细胞术检测HUVEC细胞的凋亡率。免疫印迹（Westernblot）法检测HUVEC细胞内凋亡通路相关蛋白的表达。结果：MTT结果显示，HUVECs的活力随PM2.5处理的浓度和时间增加而降低，呈明显的浓度-效应和时间-效应关系，与对照

6、组相比（P<0.05，P<0.01）。荧光显微镜下，PM2.5悬液处理组的HUVEC细胞内可见典型的凋亡小体。而且HUVEC细胞的凋亡率随PM2.5处理的浓度增加而增加，呈明显的剂量-效应关系，与对照组相比（P<0.05，P<0.01）。PM2.5作用下，HUVEC细胞内，p53、p38总蛋白和蛋白磷酸化（Phospho-p53【Ser15】、Phospho-p38MAPK）水平都升高；Bax蛋白升高，而Bcl-2蛋白降低，至Bax/Bcl-2比值升高；总Caspase9、Caspase3、Caspase7和PARP蛋白水平降低，而其活化片段CleavedCaspase9、Cleaved

7、Caspase3、CleavedCaspase7和ICleavedPARP水平升高。结论：1.PM2.5能诱导HUVEC细胞凋亡，且具剂量-效应关系。2.PM2.5致HUVECs凋亡的分子信号通路：通过促进p53和p38蛋白的磷酸化，从而使Bax表达升高，Bcl-2表达降低，使细胞内Bax/Bcl-2比值升高，进一步活化Caspase-9，通过Caspase-3和Caspase-7途径及PARP蛋白，最终使细胞HUVEC凋亡。关键词