nesfatin-1nucb2在大鼠初情期启动中的作用与机制研究

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1、．：０３６４分类号：Ｓ８５２４单位代码１密级：１２：学号７２０２５９么旅在４义管硕±学位论文Ｎｅｓｆａｔ－ｉｎ１／ＮＵＣＢ２在大鼠初情期启动中的作用与奶制研究－Ｔｈｅ反ｏｌｅａｎｄＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＮｅｓｆａｔｉｎ１／ＮＵＣＢ２ｉｎＰｕｂｅｒｔｙＯｎｓｅｔｏｆＲａｔ？研究生；王斋尧指导教师；李福宝教授合作指导教师：方富贵教授＇申请学位口类级别：农学硕±＇？．专业名称：临床兽民学研究方向：兽民临庆诊疗技术所在学阮：动物科技学院答辩委员会主席；

2、郑二零一五年六月AnhuiAgriculturalUniversityMasterDegreeThesisTheroleandmechanismofNesfatin-1/NUCB2inpubertyonsetofratAnswerer：WangYao-yaoAdvisor：Prof.LiFu-baoCo-Advisor：Prof.FangFu-guiMajor：ClinicalVeterinaryScienceResearchField：VeterinaryClinicalDiagnosticandTreatmentalTechnologyInstitute：Colle

3、geofAnimalScienceandTechnologyAnswerCommitteeChairman：June2015本项研究受下列基金资助：国家自然科学基金资助项目（31472096）和高等学校博士学科点专项科研基金博导类资助课题（20123418110004）SupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(Grant31472096),andSpecializedResearchFundfortheDoctoralProgramofHigherEducationfromMinistryofEducationScie

4、nceandTechnologyDevelopmentCenter,Beijing,P.R.China(Grant20123418110004).独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加レ义标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：—！聋遠签字曰期：７４＾＾＾月§曰！／学位论文版权使用授权书

5、本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位讫文全文数据库》，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适，向社会公众提供信息服务用本授权书。）学位论文作者签名：指导教瞧名：签字曰期：年；７年月３曰签字曰期知／月若円Ｃ乂＾：学位论文作者毕化后去向工作单位；电话：通信地址：邮编：摘要目的：探讨

6、Nesfatin-1/NUCB2在下丘脑-垂体-卵巢上的定位，分析Nesfatin-1/NUCB2mRNA在初情期发育进程中大鼠下丘脑的表达丰度及与生殖激素相关基因的联系。研究外源性Nesfatin-1对初情期启动，促性腺激素、性腺激素的分泌及其基因表达的影响。从而探明Nesfatin-1/NUCB2及其mRNA的时空表达规律及其对大鼠初情期启动的影响与机制，为Nesfatin-1/NUCB2在生殖系统调控方面的进一步研究提供科学的理论依据。方法：（1）分离成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢和子宫，经4%多聚甲醛固定，制成石蜡切片，采用免疫组织化学方法观察Nesfatin-1的定

7、位。（2）实时荧光定量PCR（real-timefluorescentquantitativePCR，qRT-PCR）法分析Nesfatin-1/NUCB2mRNA、Tac2mRNA、GnRHmRNA在初情期发育进程中大鼠下丘脑的表达丰度，并分析其相关性。（3）采用2%的戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔注射，麻醉后固定于大鼠脑立体定位仪，用50pmolNesfatin-1对初情期前和成年雌性大鼠分别进行侧脑室注射，分别于15min和60min采血，取血清，酶联免疫分析法（enzyme-linkedi