mir-27a促肝癌增殖及其作用机制的研究

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1、MiR-27a促肝癌增殖及其作用机制的研究PromotionEffectsandMechanismsofMiR-27aonHepatomaCellProliferation作者姓名：李硕专业名称：外科学研究方向：肝胆胰疾病基础与临床指导教师：张学文教授学位类别：医学博士培养单位：吉林大学中日联谊医院论文答辩日期：2015年5月28日授予学位日期：2015年5月28日论文评阅人：答辩委员会组成：姓名职称工作单位姓名职称工作单位曾宪录教授东北师范大学主席刘金钢教授中国医科大学附属第四医院王广义教授吉林大学第一医院委员田利国主任中国实用

2、外科杂志刘连新教授哈尔滨医科大学第一朱筱娟教授东北师范大学生命科学学院临床医学院张学文教授吉林大学中日联谊医院万云乐教授中山大学附属第六医院李巍教授吉林大学中日联谊医院贾莉教授大连医科大学王辉教授吉林大学中日联谊医院提要研究背景：肝细胞肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是临床上较常见的恶性肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率。目前公认的治疗方法是以手术为主的综合治疗，但由于肝癌早期缺乏特异性体征，患者发现肿瘤时往往处于癌症的中晚期，而肝癌术后又极易出现复发和转移，所以多数患者的预后并不理想。因此，人们急需

3、寻找新的治疗靶点以提高肝癌的治疗效果。微小RNA（MicroRNA）是一组非编码小RNA，以转录后调节的方式影响着细胞的生长、增殖、分化过程，并通过抑制下游靶基因的表达发挥调节功能，可同时调控多种下游靶基因。作为microRNA家族中的重要成员之一，MiR-27a不仅参与脂质、骨代谢以及血液系统疾病的调节，还被证明在不同类型肿瘤中都能起到促癌功能。过氧化物酶增殖物激活受体-γ（PPAR-γ），是脂代谢过程中重要的调节因子，同时也被证明能够抑制包括肝癌在内的多种肿瘤的发展。目前仅有少量文献报道MiR-27a在肝癌中具有高表达现象，但

4、其与肝癌发生发展的关系尚不清楚。研究目的：阐述miR-27a在肝癌中的表达及作用机制，同时探讨miR-27a通过抑制靶基因PPAR-γ的表达影响肝癌增殖和发展的机制，为开发肝癌诊治的新靶点提供了理论依据。研究内容：Realtime-PCR方法分析正常人与肝癌患者血清及肝癌组织中miR-27a表达差异；Realtime-PCR方法检测人正常肝细胞系HL-7702与人肝癌细胞系HepG2、Bel-7402、Bel-7404中miR-27a表达水平；应用MiR-27a人工合成类似物mimics及抑制剂inhibitors分别转染HepG

5、2细胞系，通过MTT方法检测其对肝癌细胞生长增殖的影响；流式细胞术检测转染后肝癌细胞凋亡及细胞周期变化；荧光素酶报告基因检测PPAR-γ是否为miR-27a的下游靶点；免疫组化技术检测临床病理切片中PPAR-γ表达；应用PPAR-γ配体激动剂罗格列酮作用于HepG2细胞系，通过WesternBlot方法检测miR-27a与罗格列酮刺激后PPAR-γ蛋白表达水平。研究结果：1.miR-27a类似物对HepG2细胞特性影响I肝癌患者血清、组织样本及肝癌细胞系中miR-27a高表达，转染miR-27amimics可加速肝癌细胞生长，诱导

6、G1/S期转化，促进细胞增殖；转染miR-27ainhibitors可诱发肝癌细胞G1期阻滞，抑制细胞增殖，增加凋亡比例。2.miR-27a对PPAR-γ的影响PPAR-γ的3’-UTR区存在miR-27a的互补序列，是miR-27a的下游靶基因；转染miR-27amimics后肝癌细胞内PPAR-γmRNA及蛋白表达明显受抑制；罗格列酮刺激能够相对逆转miR-27a对肝癌细胞增殖特性及PPAR-γ蛋白表达水平的影响。研究结论：MiR-27a在肝癌高表达，能够通过靶基因PPAR-γ，诱使G1/S期转化，促进肝癌细胞增殖，抑制miR

7、-27a的表达能够导致细胞出现G1期阻滞，抑制肝癌细胞增殖，同时促进肝癌细胞凋亡。PPAR-γ配体激活剂罗格列酮能够增强PPAR-γ的表达，抑制肝癌细胞增殖，相对逆转miR-27a的作用。II中文摘要题目：MiR-27a促肝癌增殖及其作用机制的研究专业：外科学指导教师：张学文教授作者姓名：李硕肝细胞肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是全球最常见的消化系统恶性肿瘤之一，因其发病率和死亡率较高，每年因该病死亡人数多达69万。目前世界公认的治疗方法仍然是以手术为主的综合治疗，但由于肝癌早期缺乏特异性体征，患者

8、发现肿瘤时往往处于癌症的中晚期，而肝癌术后又极易出现复发和转移，所以多数患者的预后并不理想。随着索拉菲尼等分子靶向药物的应用，人们逐渐开始思考能否通过基因调节的方法抑制肝癌的发生和发展。但是由于肝癌发病机制十分复杂，是一种多基因多通路相关性疾病，单