lasp-1在hbx促肝癌细胞增殖和迁移中作用地研究

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1、⋯11111]1IIIIIt1111111Y1885083l材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”302方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”30结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39·结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41论文图片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”49综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54攻读硕士学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·67致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯69论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、69论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·70徐州医学院硕士学位论文缩略词cDNACCK．8DAPIDMSOEBHBVHBXHCCHepG2HRP英文全称缩略词表Abbreviations中文全称complementdeoxyribonucleicacid互补脱氧核糖核酸CellCountingKit一8细胞增殖检测试剂盒4’，6-diamidino·2一phenylindole4。，6-二脒基-2-苯基吲哚Dimethylsulfoxide二甲基亚砜Ethidiumbromide溴化乙锭HepatitisBvirusHe

4、patitisBvirusXgene乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒X基因Hepatocellularcarcinoma肝细胞癌Humanhepatocellularlivercarcinoma人肝癌细胞株celllineLASP-·1LIMandSH3domainprotein··1mI矾APBSPMSFIU’-PCRRNaseARNasinsiRNAmessengerRNA辣根过氧化物酶信使核糖核酸Phosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液Phenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟ReverseTranscrip

5、tion·PolymeraseChain逆转录聚合酶链反应ReactionRibonucleaseARibonucleaseinhibitor核糖核酸酶A核糖核酸酶抑制剂小干扰RNA徐州医学院硕士学位论文SDS．PAGESodiumdodecylsulfatepolya—crylamide十二烷基硫酸钠一聚丙烯嘶tonX．100gelelectrophoresis2酰胺凝胶电泳曲拉通X．100徐州医学院硕士学位论文LASP．1在HBX促肝癌细胞增殖和迁移中作用的研究中文摘要目的探讨乙肝病毒X蛋白能否通过上调LASP-1及其蛋白表达从而促进肝癌细胞的增殖和

6、迁移。方法(1)应用脂质体法将pcDNA3．1，pcDNA3．1-X分别转染HepG2细胞。经G418筛选，克隆，建立阴性对照的细胞模型HepG2．Mock和稳定表达HBX的细胞模型HepG2．HBX。通过RT-PCR、Westernblot方法对细胞模型中HBXmRNA及蛋白进行检测，分析细胞模型中HBX的表达情况。(2)采用RT-PCR、Westernblot检测HepG2-Mock和HepG2-HBX细胞中的LASP-l基因及蛋白的表达情况；采用免疫荧光检测LASP-l蛋白在HepG2一Mock，HepG2一HBX细胞内的分布；采用Westembl

7、ot检测PI．3K信号通路中的p-Akt蛋白的表达情况，运用阻断剂LY294002阻断PI．3K信号通路的激活，检测LASP．1蛋白的表达，明确PI．3K信号通路的激活在HBX促进LASP．1表达的作用。(3)构建LASP．1的siRNA表达质粒，并转染HepG2．HBX细胞。转染48h后，运用Westernblot检测LASP．1蛋白的表达情况，明确siRNA对LASP—l蛋白的抑制效果。采用CCK．8实验、平板克隆形成实验检测HepG2-Mock，HepG2一HBX细胞的增殖情况，Transwell和划痕愈合实验方法观察HepG2一Mock，HepG

8、2一HBX细胞的迁移能力，明确HBx能否促进肝癌细胞的增殖和迁移，及LASP．1