hbx在肝癌细胞中通过下调mir-199a增强akt的表达

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1、DOI：10.16016/j.1000-5404.201409217HBX在肝癌细胞中通过下调miR-199a增强AKT的表达谌玲，谭翠（400016重庆，重庆医科大学附属第一医院分子肿瘤及表观遗传学实验室）[摘要]目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitisBvirusXprotein,HBX)调节miR-199a的表达在HBV相关性肝癌发生中的分子机制。方法重组HBX腺病毒(Ad-HBX)感染人肝癌HepG2细胞，HBX的siRNA转染稳定表达HBV基因的人肝癌HepG2.2.15细胞，荧光定量PCR方法检测H

2、BV相关性肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、miR-199a、AKT的mRNA表达水平及运用Westernblot方法检测肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、AKT的蛋白表达水平；分别用miR-199amimics和miR-199ainhibitor的转染肝癌细胞后，荧光定量PCR方法检测肝癌细胞中AKT的mRNA表达水平及运用Westernblot方法检测肝癌细胞中AKT的蛋白表达水平。结果miR-199a在HepG2.2.15细胞中表达水平显著低于HepG2细胞，并且证实其表达下调受到了HBX的调控(P＜0.05)，H

3、epG2.2.15细胞中AKT表达水平显著高于HepG2细胞(P＜0.05)，在HepG2.2.15细胞中过表达miR-199a能明显下调AKT表达水平以及在HepG2细胞中抑制miR-199a能明显上调的AKT表达水平(P＜0.05)，此外，我们还发现miR-199a的表达量在HBV相关性肝癌组织比相应的癌旁组织表达降低。结论HBX可以通过miR-199a调节AKT导致HBV相关性肝癌发生的分子机制。[关键词]乙型肝炎病毒X蛋白；微小RNA；肝癌；AKT信号通路[中图法分类号]R73-3；R73-31；R735[文

4、献标志码]AHBXenhancingtheexpressionofAKTthroughdown-regulationofmiR-199ainhepatitisBvirusrelatedhepatocellularcarcinomaChenling，Tancui（MolecularOncologyandEpigeneticsLaboratory,TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China）[Abstract]O

5、bjectiveToexplorethepotentialmechanismofHBXregulatesmiR-199aexpressionthatplaysimportantrolesingeneregulationduringhepatocarcinogenesis.MethodsHBXrecombinantadenovirus(Ad-HBX)infectioninHepG2cells,siRNA-HBxtransfectedHepG2.2.15cells,fluorescencequantitativePCRm

6、ethodfordetectingHBX,miR-199a,AKT'smRNAexpressioninHBV-relatedHCCtissuesandhepatomacells.WesternblotshowedtheproteinexpressionlevelsofHBXandAKTinHCCtissuesandhepatomacells;respectivelyaftertransfectionwithmiR-199amimicsandmiR-199ainhibitor,quantitativePCRandWes

7、ternblotdetectionexpressionofAKTinlivercancercells.ResultsExperimentalresultsshow,miR-199aexpressioninHepG2.2.15cellswassignificantlylowerthanHepG2cells(P<0.05),andconfirmeditsdownregulationindeedrelatedwithHBXregulation,AKTexpressionlevelsinHepG2.2.15cellswere

8、significantlyhigherthaninHepG2cells(P<0.05),HepG2.2.15cellsoverexpressingmiR-199aexpressionlevelscanbesignificantlyreducedAKT(P<0.05),inhibitingmiR-199acanbesignificantlyinc