microrna在男性不育中的功能研究

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1、UniversityofScienceandTechnologyofChina博士学位论义在男性不育中的论文题目功能研免黄对龙作者姓名遣传学学科专业孙斐教援导师姓名二〇一五年五月完成时间博士学位论文在男性不育中的功能研究作者姓名：黄河龙学科专业：遗传学导师姓名：孙斐教授完成时间：UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationforDoctor'sdegreeStudyonthefunctionofmicroRNAinmaleinfertilityAuthor'sName:HelongHuangSpecGeneticiality:Sup

2、ervProf.FeiSunisor:Finishedtime:April15th,2015中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除己特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：签字口期中国科学技术大学学位论文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，卩：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅，可以将学位论文编入《中国

3、学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。□公开口保密（—年）作者签名：夜导师签名签字日期：签字曰期：摘要摘要近年来，不育己俨然成为困扰全球范围无数育龄家庭的严峻问题。根据标准适龄夫妻未采取避孕手段一年时间仍不能受孕则定义为不育。有数据显示，的家庭不能通过自然方式受孕，其中男性不育因素占到一半。尽管部分男性不育是由于己知原因造成，如生殖道感染，隐睾，精索静脉曲张，输精管堵塞，性功能障碍等等，但是多数的男性不育都被诊断为未知原因的非梗阻性无精症（。而且，病人

4、具有较低的精子获取率，临床受孕率以及更高的精子损伤率。因此，开展研究的发病机理和潜在的分子机制能为临床治疗患者提供方向和指导意见。精子发生是一个精密调控的生理过程，发生在睾丸内的曲细精管，主要包括从未分化的精原干细胞发育至高度分化的成熟精子细胞的过程，包括进行有丝分裂的精原细胞以及进行减数分裂的精母细胞。在精子发生后期，减数分裂之后转录活性受到抑制。转录形成的主要是受到转录后调控，其中很重要的因子即是。即微小，是一段由个核苷酸序列组成的非编码，通过自身的种子序列（与其基因的端非编码区域（进行完全或不完全配对结合，降解其靶基因的或抑制祀基因翻译的方式来进行基因表达的调控。大量证据显示，具有较高

5、的损伤的生殖细胞导致生精过程的受损，进而造成男性不育。我们研究组先前的小分子芯片结果显示，在精子成熟抑制（病人睾丸组织中呈显著下调，并且通过原位杂交和实时荧光定量技术发现了主要定位表达于精子发生早期的精原细胞和初级精母细胞。而早期生精细胞由于有丝分裂和减数分裂，重组染色体，具有损伤的较高风险。然而，是否参与调控在精子发生过程中的损伤，以何种形式调控？本论文的首要目的就是阐明在精子发生过程中损伤的调控机理和分子机制。首先我们通过患者睾丸组织铺展发现，患者睾丸组织的损伤率是正常对照的倍左右。另外，通过细胞免疫荧光和蛋白质印记技术我们检测了损伤位点的标识分子结果显示减少聚集点和聚集程度，抑制的蛋白

6、水平，而且由于顺铀药物（能造成细胞损伤，经顺怕药物处理后，我们发现能够增强人源睾丸胚胎瘤细胞（对顺铂药物的敏感性，说明参与损伤途径。通过利用分子信息学和荧光素酶报告基因技术，我们发现了蛋白磷酸酶核内靶向亚基（是的靶摘要基因，而且经介导实验发现参与到对的调控途径。同时，由于能诱导细胞周期停滞在细胞周期的期，减少复制期（期）细胞，从而减少的表达。但是通过，基因沉默发现，并不直接影响细胞周期。综上所述，通过两条独立的通路调控，一方面是通过靶向从而介导的生成；另一方面通过抑制了细胞周期的停滞，从而减少的表达。另外一方面，导致男性不育的一个重要原因是隐睾，隐睾的发比率为而且发病率逐年上涨。在不发达国家

7、中，隐睾的患病率则更为严重。目前临床上治疗隐睾的方法主要是睾丸固定术，医生一般要求在月岁之间进行手术，以减少不育和睾丸癌症的风险。有研究表明，即使手术成功，男婴在成年后患男性不育的概率达以上，隐睾的发生机制和对睾丸造成的分子通路仍然没有明确定论。近年有研究报道隐睾与下丘脑垂体性腺轴激素生成，基因的突变等因素有关，但是隐睾中的调控机制还鲜有报道。因此本论文也通过建立隐睾小鼠模型，探索研究了在小鼠隐睾模型中的功能