egm123抗血清对体外培养原头蚴免疫杀伤研究

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3、’；／＾ｉ．Ｍ；；藉．繳．，．如｜３騰（輪一臟心古狐张．本文是“青年人培养”项目子课题《EgM123抗血清对体外培养原头蚴免疫杀伤研究》（NO:KY2014013）项目负责人：赵莉新疆畜牧科学院兽医研究所EgM123抗血清对体外培养原头蚴免疫杀伤研究摘要棘球蚴病是由棘球绦虫中绦期（幼虫）引起的一种人畜共患寄生虫病，其中间宿主种类繁多，但绵羊是最适宜的中间宿主，犬是适宜终末宿主。包虫病防控措施可通过抑制终末宿主体内棘球绦虫成虫虫卵产生以切断病原循环链，从而减少棘球蚴病的传播。该寄生虫在中间宿主体内发育过程中，幼虫阶段产生的原头蚴（protoscolex

4、，PSC），原头蚴在体外培养的条件下，可发育成囊泡，为防治包虫病在分子调控、药物干预等研究提供一个良好的模型。本研究主要是利用细粒棘球绦虫发育成熟的成虫体内与发育相关的基因Egm123，将其重组到质粒pET41b中并转染至大肠杆菌，经诱导表达、纯化GST-EgM123融合蛋白，并鉴定该蛋白的免疫活性，SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子约为56.1kD。用GST-EgM123融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备高免血清，经Westernblot鉴定表达蛋白的抗原性，并用ELISA方法测定抗体的效价，其效价达到1：320000以上。通过原头蚴体外培养技术检

5、测EgM123特异性抗血清对其杀伤率，加入新鲜豚鼠血清开展含补体条件下特异性抗体对体外培养原头蚴的杀伤率。将原头蚴与GST-EgM123高免血清、His-EgM123高免血清和两种高免血清+豚鼠血清共培养，经相同培养时间和血清含量不等的培养条件下，与对照组观察高免血清在体外对原头蚴免疫杀伤作用。结果显示，在高免血清组中两种血清均灭活补体后，与对照组相比，原头蚴死亡率差异不显著（P＞0.05）；正常血清组在200μL高免血清作用6天，原头蚴死亡率分别为42.53%和51.80%，与对照组相比，差异显著（P＜0.05）；加入正常豚鼠血清（含补体）的高免血清组，

6、与对照组相比，原头蚴死亡率达100%，差异显著（P＜0.05）。以上结果说明，制备出的EgM123抗血清，对体外培养的原头蚴具有免疫杀伤作用，为研制包虫病疫苗及进行相关诊断奠定了基础。关键词：原头蚴；EgM123融合蛋白；高免血清；体外培养；免疫杀伤IStudiesonDestructionofImmuneEgM123AntiseraontheProtoscolexinVitroAbstractHydatiddiseaseiscausedbyEchinococcusmultilocularismetacestode(larva)causeazoonotic

7、parasiticdiseases,whichhostsawiderange,butthesheeparethemostsuitableintermediatehosts,dogsaresuitablefortheendhost.HydatiddiseasepreventionandcontrolmeasurescaninhibitterminalsfromadultEchinococcuseggsinthehosttoswitchoffthepathogencyclechain,therebyreducingthespreadofHydatiddisea

8、se.Inthedevelopmentoftheparasitei