DCA、CDCA诱导细粒棘球蚴原头节凋亡作用机制的体外研究.pdf

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1、分类号：R383.3密级：公开学号：2015210991单位代码：10759石河子大学硕士学位论文DCA、CDCA诱导细粒棘球蚴原头节凋亡作用机制的体外研究学位申请人汤光耀指导教师吕海龙副教授申请学位类别临床医学硕士专业名称临床医学研究领域外科学所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年5月InvitroeffectofdeoxycholicacidandchenodeoxycholicacidonviabilityandapoptosisinEchinococcusgranulosusADissertationSubmittedtoShiheziUnivers

2、ityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByTangGuang-yao(GeneralSurgery)DissertationSupervisor:LvHai-longMay,2018石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示

3、谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：本研究以细粒棘球蚴原头节为实验对象，使用不同浓度的DCA（deoxycholicacid,脱氧胆酸）和CDCA（chenodeoxycholicacid,鹅脱氧胆酸）体外作用于

4、细粒棘球蚴原头节，探讨DCA和CDCA体外诱导细粒棘球蚴原头节凋亡的作用机制。方法：体外分别应用500,1000,2000,and3000μmol/LDCA、CDCA处理细粒棘球蚴原头节，根据实验要求培养一定时间，然后使用0.1%伊红染色液染色原头节，接着移至倒置显微镜下观察原头节的活力及形态，记录原头节存活与死亡的数目，依据获得数据绘制原头节的存活曲线；用ROS检测试剂盒，按照说明书要求操作并在荧光显微镜下观察不同浓度DCA、CDCA作用下原头节内ROS的水平变化；通过使用Fluo4/AM钙离子探针，利用流式细胞仪检测DCA、CDCA作用原头节后Ca2+的水平

5、变化；用westernblot技术检测原头节内GRP-78、Caspase-12、Bcl-2蛋白表达水平；采用Caspase-3试剂盒检测原头节内Caspase-3的酶活性的变化。结果：将不同浓度DCA、CDCA作用于细粒棘球蚴原头节，观察到DCA、CDCA均对细粒棘球蚴原头节有抑制作用。在实验中，观察到空白组及DMSO对照组原头节的活力变化不明显。DCA作用2d后，500,1000,2000and3000μmol/L组死亡率分别为12.14%，41.57%，69.79%和84.7%；持续观察，作用4d后，500,1000,2000and3000μmol/L组死

6、亡率分别为39.99%，45.35%，83.7%和93.51%，3000μmol/L组致死效果最显著，在第6d时原头节的死亡率为100%。CDCA作用2d后，500,1000,2000and3000μmol/L组死亡率分别为6.9%，12%，15.87%和62%；持续观察，作用4d后，500,1000,2000and3000μmol/L组死亡率分别为8%，19%，54.79%和85%，3000μmol/L组致死效果最显著，在第7d时原头节的死亡率为100%。ROS检测试剂盒发现，不同浓度的DCA、CDCA组ROS水平与正常对照组相比均明显升高（P<0.05），并

7、且随着DCA、CDCA的浓度增加和作用时间延长，ROS的水平也随之升高。流式细胞检测技术发现，相比正常对照组，不同浓度的DCA、CDCA均可提高原头节内Ca2+的水平（P<0.05）。Westernblot检测表明，DCA、CDCA可降低原头节内GRP-78、Bcl-2蛋白的表达水平，提高Caspase-12蛋白表达水平（P<0.05）。Caspase-3活性检测试剂盒表明，同正常对照组比较，不同浓度DCA、CDCA均可提高原头节内caspase-3的酶活性（P<0.05）。结论：1.DCA、CDCA体外能够抑制细粒棘球蚴原头节的活力，破坏原头节的内部结构，导致

8、原头节死亡。2.DCA、