细粒棘球蚴重组egp

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1、细粒棘球蚴重组EgP：罗永云，李昭宇，师志云，棘怀庆，雄英，孙俊峰，赵巍【摘要】：目的探讨细粒棘球蚴重组抗原（rEgP-29）接种小鼠后的免疫保护机制。方法ICR小鼠随机分为免疫组和对照组，采用rEgP-29免疫、Eg原头蚴攻击感染小鼠后20周，以MTT法检测经刀豆蛋白（ConA）和rEgP-29刺激后T淋巴细胞增殖水平，ELISA法检测体外脾细胞诱生的IL-2、IL-4和IFN-γ水平。结果MTT法检测证实rEgP-29免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖水平明显高于对照组（P＜0.05）；ELISA法检测表明，免疫组小鼠经ConA或rEgP-29诱生的IL-2、IFN-γ水平与对照组相比显著增

2、加（P＜0.05），而IL-4水平无明显变化。结论rEgP-29可能诱导Th1型免疫应答为主，对抗Eg原头蚴攻击感染。【关键词】细粒棘球蚴；重组抗原EgP-29；细胞因子　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheimmunologicmechanisminmiceimmunizedicephocytesbyMTTassay，andtomeasurethelevelofIL-2，IL-4andIFN-γbyELISA.ResultsAsdemonstratedbytheMTTassay，therEgP-29antigencouldstimulatespeci

3、ficallytheproliferationofsplenicTlymphocytesinmice.ELISAassayindicatedthatthelevelofIL-2andIFN-γinimmunitygroupulusiceagainstEchinococcusgranulosusprotoscolicesinfection.　　Keya公司。　　1.3动物分组　　将20只小鼠随机分为两组，A组为免疫组，注射rEgP-29加弗氏佐剂10μg/100μL；B组为对照组，注射弗氏佐剂加PBS每只100μL，每2周免疫1次，共3次。采用背部皮下多点注射免疫，每次注射量为100μL

4、/只。　　1.4攻击感染　　免疫小鼠8周后，免疫组和对照组每只小鼠用1500个棘球蚴原头节腹腔内注射进行攻击。至实验结束时，两组各有2只小鼠死亡。　　1.5脾细胞悬液制备　　攻击感染后第20周剖杀各组小鼠。小鼠眼眶取血，颈椎脱臼处死后置75%乙醇中消毒3min；无菌取脾，匀浆，用2mLPBS冲洗，200目尼龙膜过滤，滤液置10mL离心管，加5～10倍的红细胞裂解液溶解红细胞，离心5min（2000r/min）；去上清，用PBS洗2次，离心5min（2000转/min）；去上清，加2mLPBS，计数后用含10%BSA的RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×106/mL；台盼蓝染色后计数

5、脾细胞存活率＞95%。　　1.6攻击感染后小鼠脾淋巴细胞增殖水平测定（MTT法）　　上述攻击感染后20周剖杀的各组小鼠的脾细胞悬液（5×106/mL）加至96孔细胞培养板，每份标本6个平行孔，每3个平行孔加100μL细胞悬液和100μLConA，另3个平行孔各加100μL细胞悬液和100μL重组抗原，用RPMI1640配液，每孔终浓度为5μg/mL。并设3个对照孔，加100μL细胞悬液和100μLRPMI1640培养液。置37℃5%CO2条件下培养72h，培养结束前4h，加入20mLMTT（5mg/mL），继续培养4h，结束后2000r/min，离心10min，弃100μL上清，加10

6、0μL二甲基亚砜（DMSO）振荡，轻轻反复吹打至甲簪（formazane）充分溶解，测定光密度（OD490nm）。　　1.7攻击感染后小鼠细胞因子的诱生及检测　　上述攻击感染后20周各组小鼠的脾细胞悬液（5×106/mL）100μL/孔加至96孔细胞培养板，分为ConA刺激组、rEgP-29刺激组和无刺激物组，分别加入100μLConA和rEgP-29诱生细胞因子，工作浓度皆为5μg/mL，每份标本均重复3孔，37℃，5%CO2培养72h，2000转/min，离心10min，收集上清液100μL，-20℃冰箱冻存，用于检测脾细胞诱生的IL-2、IL-4和IFN-γ水平（均设2个复孔）。

7、同时设PBS对照组。IL-2、IL-4和IFN-γ的含量测定按试剂盒说明书进行。　　1.8统计学方法　　采用SPSS11.0软件进行分析，组间比较用单因素方差分析。当用rEgP-29诱生时，免疫组小鼠脾细胞分泌的IL-2水平显著高于对照组（P＜0.05）；而用ConA或不加任何刺激物时，免疫组IL-2水平较对照组增高，但差异无统计学意义（表2）。表2rEgP-29免疫、原头蚴攻击后小鼠脾细胞分泌IL-2水平（略）　　2.3攻击感染后小鼠脾细胞分