γδt细胞在细粒棘球蚴感染中作用的初步研究

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：201200015宁夏医科大学硕士研究生学位论文γδT细胞在细粒棘球蚴感染中作用的初步研究ApreliminarystudyintheroleofγδTcellsinfectedwithEchinococcusgranulosus学位申请人：何鑫指导教师：赵嘉庆副教授合作指导教师：王浩副教授申请学位门类级别：医学专业名称：免疫学研究方向：感染免疫所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一五年三月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeAp

2、reliminarystudyintheroleofγδTcellsinfectedwithEchinococcusgranulosusStudent’sName:HeXinSupervisor：ZhaoJiaqingassociateprofessorAssistantsupervisor:WangHaoassociateprofessorSubjectCategory:MedicalScienceMajor:MedicalImmunologySpecialty:ImmunologyofInfectionSchool:BasicMedicalSciencesCompletionDa

3、te:Mar.2015宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要γδT细胞在细粒棘球蚴感染中作用的初步研究摘要目的通过研究包虫病患者以及小鼠感染模型中γδT淋巴细胞免疫反应，探讨γδT淋巴细胞在包虫感染免疫作用机制，为进一步探讨抗包虫病的免疫机制和包虫病的防治提供新的实验证据。方法（一）检测包虫病患者中γδT细胞的变化:流式细胞术检测包虫病患者和正常人γδT细胞数目和比例；流式分选γδT细胞并用anti-TCRγδ+IL-2刺激后观察γδT细胞体外扩增培养；纯化得到的rEg14-3-3进行SDS-PAGE电泳；对纯化获得的rEg14-3-3进行westernblot鉴定；MTT法和流式检测不同

4、抗原（囊液，囊壁，原头蚴，rEg14-3-3）刺激γδT细胞增殖能力；ELISA检测不同抗原（囊液，囊壁，原头蚴，rEg14-3-3）刺激慢性包虫病患者和正常人γδT细胞后IFN-γ，TNF-α，IL17A，TGF-β和IL-4细胞因子的表达；qRT-PCR检测IFN-γ,Perforin,GranzymeAandB,和FasLmRNA的表达。（二）检测小鼠继发感染模型中γδT细胞的变化：从包虫病手术患者包囊中分离原头蚴，经腹腔注射感染BALB/c小鼠；建立细粒棘球蚴继发感染动物模型；感染+模型小鼠中小肠组织IEL淋巴细胞的分离，流式细胞术检测IELγδT细胞数量及表型。结果细粒棘球

5、蚴感染人后T细胞检测结果:从健康人与病人外周血中分离PBMCs，通过流式检测发现，病人外周血中T细胞无论从绝对数量还是从比例以及V2亚型都明显下降（有统计学意义）经流分选出T细胞后，加入anti-TCRγδ+IL-2可促进其体外扩增；对体外扩增的T细胞实验研究发现，T细胞对原头蚴粗抗原刺激能够产生明显的增殖活化，而对囊液、囊壁以及重组抗原14-3-3无应答（P<0.01）；对于经不同成分刺激后，检测发现对于原头蚴刺激T细胞细胞因子IFN-与TNF-α显著的升高（P<0.01）；T细胞在原头蚴抗原刺激后，细胞毒作用分子（穿孔素，颗粒酶A和B，IFN-γ和

6、FasL）的mRNA表达水平明显上调，有统计学意义（P<0.01）。小鼠继发感染细粒棘球蚴模型中T细胞检测结果:原头蚴腹腔感染的模型小鼠建+立成功；IEL细胞数量明显减少（P<0.05）；小肠IELγδT细胞也明显减少（P<0.05）。I宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要结论体外实验证实，在细粒棘球蚴患者中，原头蚴粗抗原可有效诱导外周血单个核细胞（PBMC）中γδT细胞扩增，其主要效应分子IFN-γ的mRNA表达及分泌明显增高，另外原头蚴粗抗原可刺激穿孔素，颗粒酶A和B，FasL的mRNA表达水平明显增高。说明在细粒棘球蚴感染中γδT细胞参加了宿主的免疫应答，并具有抗感染作用。体内

7、试验证实，细粒棘球蚴患者PBMC中γδT细胞（尤其是Vδ2+γδT细胞）明显降低，在细粒棘球蚴感染小鼠模型中，慢性感染阶段小鼠的小肠IEL+γδT细胞与正常对照组相比显著下降，与此同时，小肠IEL亦明显下调。说明在慢性感染阶段γδT细胞受到抑制。关键词细粒棘球蚴，γδT细胞，感染II宁夏医科大学硕士学位论文英文摘要ApreliminarystudyintheroleofγδTcellsinfectedwithEchinococcusgranulosusAB