培养液成分变化对原头蚴体外培养的影响

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1、新疆农业大学硕士学位论文培养液成分变化对原头蚴体外培养的影响姓名：袁丽英申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：岳城;张壮志20090501培养液成分变化对原头蚴体外培养的影响摘要细粒棘球蚴(EchinococcosisCyst)是以包囊形式在人和其它中间宿主的内脏器官中生长，由囊壁和内含物(生发囊、原头蚴、子囊、孙囊和囊液等)组成。原头蚴在不同宿主体内发育分化方向不同：在绵羊和人体内，原头蚴向无性繁殖方向分化，形成包囊；在犬科动物体内，原头蚴向有性繁殖方向分化，形成产卵的成虫。本研究分别用三组培养液(I组：含10％囊液的RPMI．1640培养液；I

2、I组：含10％犊牛血清的RPMI．1640培养液；III组：纯RPMI．1640培养液)将采集的新鲜原头蚴，按相同浓度在37。C、5％C02条件下体外培养15天。在培养后的第3、9和15天观察原头蚴生长发育情况。结果表明：不同培养时间、不同培养液成分对原头蚴生长发育有一定影响。其中，II组原头蚴形态变化最明显，新陈代谢旺盛；I组部分原头蚴仍处于休眠状态，但成活率最高；Ⅲ组原头蚴发育状况介于其他两组之间。结论：犊牛血清能促进原头蚴生长发育，囊液则抑制原头蚴的生长发育。以未培养原头蚴为对照、ActinI为内参基因，e9143、egTPx和ePCI为检测基因对

3、上述3组培养15天的原头蚴进行real—timePCR扩增。结果表明：egTPx和e9143在II组原头蚴中表达量最高，ePCI在I组培养的原头蚴中表达量最高(是对照组的2．1倍)。结论：egTPx、e9143基因功能与原头蚴生长发育有关，而ePCI基因功能与原头蚴生长发育的抑制性有关。以未培养原头蚴为对照，用三种高免血清(E9143血清、EgTPx血清和EPCI血清)对上述3组培养15天的原头蚴进行Western—blot检测。结果表明：EgTPx和E9143在4组原头蚴中均获表达，EPCI仅在II组的原头蚴中未获表达，在其余三组中则全部表达。结论：E

4、gTPx和E9143蛋白与原头蚴的生长发育有关，EPCI蛋白与原头蚴生长发育的抑制性相关。关键词：培养液成分；原头蚴；体外培养；发育；影响TheEffectofMediumComposionsonprotoscoleces／nvitroCultivationAbstractEchinococcusgranulosus,consistedofhydatidcystanditscontents(broodcapsuN，protoscoleces，daughtercyst，granddaughterandfluidofcyst，etc)，growinorgan

5、sofhumanandotherintermediatehostsintheformofcyst．Thedifferentiationofprotoscolecescorrelatedwithgenusofintermediatehosts．Protoscolecesprocreatedbycystinsheepandhuman，andbyeggsincanidae．Preparedthreekindsofculturemedia晰thdifferentcomponents，GroupI：RPMI一1640culturemediumwith10％flui

6、dofcyst，GroupII：RPMI一1640culturemediumwith10％calfserum，GroupIII：RPMI一1640culturemedium；andputthesameamountofnewlycollectedprotoscolecesintocultivatefor15days，withtheconditionof37。Cand5％C02．Observedtheprotoscolecesatthe3tll，the9mandthe15也day，andresultsshowedthattheculturalduration

7、andcomponentsofculturemediaaffectedprotoscolecesgrowthanddevelopment．ProtoscolecesofGroupIremainedindormancywitllthehighestsurvivalratio，andGroup11werevigorous．TheGroupIIIdisplayedintermediately．Conclusion：PCScouldconducetoprotoscolecesgrowthanddevelopment，andhydatidfluidcouldinh

8、ibit．15一dayculturalprotoscolecesfromthet