原头蚴囊液体外对小鼠脾细胞免疫逃避中的作用

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1、分类号：R392密级：学号：2010109061单位代码：10759石河子大学硕士学位论文原头蚴/囊液体外对小鼠脾细胞免疫逃避中的作用学位申请人陈小林指导教师陈雪玲教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称免疫学研究方向抗感染免疫所在学院医学院中国·新疆·石河子2013年05月TheroleofProtoscolicesandHydatidfluidinimmuneescapeofmousespleencellsinvitroADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequire

2、mentsfortheDegreeofMasterofMedicineByChenxiaolin（Immunology）DissertationSupervisor:Prof.ChenxuelingMay,2013石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权

3、保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。原头蚴/囊液体外对小鼠脾细胞免疫逃避中的作用中文摘要目的本研究通过建立原头蚴/囊液和小鼠脾细胞的共培养体系，观察该体系中TGF-β分泌量、+++++CD4CD25Foxp3T（Treg细胞）比例、CD4/CD8T细胞比值、以及NK细胞活性受体NKG2D的表达水平和NK细胞杀伤活性等一系列变化情况；探讨原头蚴/囊液抗原是否通过促进脾细+++胞

4、分泌抑制性分子TGF-β从而促进CD4CD25Foxp3T细胞分化，从而进一步下调NK活性受体NKG2D表达水平，最终导致NK细胞对原头蚴的杀伤减弱，而形成对宿主的免疫逃避。方法1.取BALB/c小鼠脾细胞，制备成细胞悬液，加入不同浓度囊液/原头蚴混合培养为实验组，加入PBS作为对照组；培养72小时后，用ELISA法检测共培养体系的上清液中TGF-β含量；同时收集共培养的细胞作为效应细胞，取Yac-1作为靶细胞（小鼠NK细胞的靶细胞，其细胞表面无MHC-I类分子表达），用LDH酶法检测共培养后NK细胞的免疫活性，同时用流式细胞仪检测NK细胞表面活性受体NKG2D的表达水

5、平。2.同法，取BALB/c小鼠脾细胞，制成悬液，加入不同浓度囊液/原头蚴为实验组，加入PBS++作为对照组；共培养72小时后，离心收集细胞，流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4/CD8++细胞比值及CD4CD25T细胞的含量，RT-PCR法检测Foxp3mRNA基因的相对表达量；3.相同浓度的原头蚴/囊液和BALB/c小鼠脾细胞悬液共培养，在0、12、24、36、48h收集细胞，检测T淋巴细胞亚群的变化情况。结果1.与对照组相比，囊液组和原头蚴组的TGF-β分泌均有所增加，有统计学意义（p<0.01）；囊液组随抗原的浓度增多而增加，其中在高浓度500ul时达到最大值；而

6、原头蚴组则在浓度为1000个/ml时达到较大值，另外结果显示，囊液抗原的作用要强于原头蚴。囊液/原头蚴组都在干预24h后TGF-β分泌显著上调，与对照组相比有统计学意义（p<0.01）。2.和对照组相比，囊液组中NK细胞的活性受体明显下调，在高浓度组的时候含量下降，有统计学意义（p<0.05），并且随着抗原的浓度增加或作用时间的增加，而NK细胞活性下降越明显，与对照组相比有统计学意义（p<0.05）。而原头蚴组对NKG2D的影响作用不大。++3.通过流式细胞检测囊液和原头蚴组的CD4/CD8细胞的比值越来越小，与对照组比较有差异（p<0.05）。++4.低浓度囊液（10

7、0ul、200ul）和原头蚴（500个/ml）的CD4CD25T细胞的含量比例较++对照组有显著的差异（p﹤0.01），而且在随着抗原含量增加时CD4CD25T细胞的含量比例是逐渐下降；特异性蛋白Foxp3的表达量在囊液组（100ul、200ul）和原头蚴组（500个/ml、1000个/ml）时和对照组也有统计学差异（p﹤0.05）。结论1.细粒棘球蚴囊液和原头蚴抗原在体外都能刺激小鼠脾细胞TGF-β分泌增加。提示包虫感染i原头蚴/囊液体外对小鼠脾细胞免疫逃避中的作用后可能通过上调该抑制性分子的表达水平而促进免疫逃逸。2.细粒棘球蚴囊液和