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1、不同培养液对小白鼠胚胎体外培养的作用 自1985年Ackerman等首先用2细胞鼠胚来对实验室进行质量控制(qualitycontrol,QC),鼠胚实验(mouseembryoassay,EMA)已成为生殖医学中心胚胎培养室质量评估,尤其是培养液质量检测最为广泛应用的方法［1］。而培养液对体外胚胎培养的重要性是不言而喻的,一种优化的培养系统可以支持胚胎在体外或移植后形成囊胚并继而发育成胎儿［1,2］。 旨在对新建IVF胚胎培养室进行质量控制,同时对培养液进行评估,在为将来开展人类胚胎体外培养时培养液的选择使用上积累实验数
2、据,本院生殖中心2014年9~12月使用3种不同培养液对昆明系小白鼠进行胚胎体外培养,并对比分析了3个不同组别之间的4细胞胚胎、8细胞胚胎、融合胚以及囊胚形成率。现报告如下。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1实验动物 7周龄雌性昆明系小白鼠(体质量30~35g),10周龄雄性小鼠(体质量35~40g),均购自浙江中医药大学实验动物中心,雌雄分笼饲养。 1.1.2药物与试剂 尿促性素(HCG)与绒促性素(HMG)均购自丽珠制药厂。简单培养液EBSS购自SIGMA公司,序贯培养液G1和G2以及配子处理液G-GAME
3、TE购自Vitrolife公司,序贯培养液Quinn's1026和Quinn's1029,人血清白蛋白(HSA)以及石蜡油均购自SAGE公司。培养液均添加10%HAS,表面覆油后置于37℃,6.0%培养箱中平衡过夜。 1.1.3耗材与设备 35mm培养皿及巴斯德管均购自美国FALCON公司,CO2气体纯度为99.999%,丹麦IVFTECH工作站,日本OLYMPUS解剖显微镜,美国THEMRO培养箱,德国LABTECHCO2浓度检测仪,美国SIGMA培养箱专用温度计。 1.2实验方法 1.2.1鼠胚获
4、取与培养 雌鼠腹腔注射10IU的HMG,48h后再注射HCG,注射后立即将雌雄按1∶1的比例合笼,48h后取胚。将孕鼠颈椎脱臼处死后用眼科剪取输卵管放于覆油的G-GAMETE配子处理液中,用1ml注射器针头将输卵管切割数次,挤出胚胎,再用拉细的巴斯德管将2细胞鼠胚收集并随机分装到覆油的3种不同培养液中,并置于培养箱中培养［3,4］。当胚胎培养到8细胞阶段,A组将胚胎转移到新配制并于前1d过夜平衡后的EBSS培养液,B、C组则分别将胚胎从G1和Quinn's1026培养液中转移到经过夜平衡后的G2和Quinn's
5、1029培养液中继续培养。 1.2.2鼠胚的观察 观察并记录24h后4细胞胚胎形成率,48h后8细胞或融合胚形成率,72h后囊胚形成率。 1.3统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。 2结果 在2014年9~12月本院新建IVF胚胎实验室共进行7个周期的鼠胚体外培养实验,累计获取2细胞胚胎534枚,其中形成囊胚382枚,总体囊胚形成率为71.54%。鼠胚培养分成3个组别进行,A组使用EBSS(Earle'sBalan
6、cedSaltSolution)简单培养液,在所获得的72枚2细胞胚胎中共有22枚最终发育成囊胚,囊胚形成率为30.56%；B组使用G1和G2序贯培养液,183枚2细胞胚胎中,129枚发育成囊胚,形成率为70.49%；C组使用Quinn's1026和Quinn's1029序贯培养液,所得279枚胚胎中有231枚发育到囊胚阶段,其形成率为82.80%。B组和C组的囊胚形成率显着高于A组(P<0.01),三组的胚胎发育情况及囊胚形成率,见表1。鼠胚于覆油35mm皿中体外培养不同时期的生长情况,见图1。【1】
7、 3讨论 实验室质控对试管婴儿结局有重要影响。体外一系列因素如温度、湿度、尘埃、挥发性有机物(VOC)、震动、噪音、光照、CO2浓度、pH、渗透压等都会对不具备任何屏障和保护功能的胚胎产生影响［1］。因此,建立稳定可靠的试管婴儿实验室,为胚胎发育提供相对稳定的场所,维持试管婴儿成功率显得尤为重要。而在诸多影响胚胎发育的因素中,培养液是直接和胚胎接触的介质,同时也是实验室最常用及最重要的消耗品,其稳定性直接决定着胚胎培养的结局。小鼠胚胎生物检测(MEA)是目前广泛用于新建或新启动周期的试管婴儿实验室的质控方法,尤其在评估培
8、养液的质量上发挥重要作用。 为了检测新建试管婴儿胚胎培养室是否达到人类胚胎培养标准,同时为今后开展试管婴儿胚胎体外培养在培养液的选择使用上积累实验数据,本院生殖中心2014年9~12月,分别用EBSS,G1/G2,Quinn's1026/1029对小鼠胚胎进行了体外
