cylda对血管新生作用的实验研究

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1、分类号：Ｑ８１３学校代码：１０６９７：１密级：公开学号２０１２２０８８二人ｆ翁ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ‘－＇．Ｉ■■＇？＇？－？、，ｒ：．－ｉ．ｊ、＇－、．－＂、二ｖ，ｏ：Ｏ：，導？＊：Ｊ，！－－ｎ：ｉ‘士字位论文＇ＭＡＳＴＥＲＳＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＣＹＬＤａ对血管新生作用的实验研究学科名称：细胞生物学作者：王晓琳指导老师：李立文教授．西北大学学位评定委员会二〇＿五年西北大学学位论文知识产权声明书本人完全了解西北大学关于收集、保

2、存、艘用学位论文的规定。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论文被查阅和借阅。本人授权西北大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关叛据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研宄所等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。＂难指导教师签名＜学位论文作者签名：王：＾＾＾（；＾年３月日年３月＂＾＾日西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下

3、进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，也不包含，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果为获得西北大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名ｅ：ＪＬｉｂｌ年３月〉日ＣＹＬＤａ对血管新生作用的实验研究中文摘要研究背景：一血管新生（Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）是成人体内血管形成的主要方式之，它指的是在组织已有的血管床上，内皮细胞以出芽的方式从小静脉中迁移出来从而形

4、成管状新生血管的过程。这个过程不仅是众多生理过程的重要基础，而且血管新生异常与众多疾病密切相关，如病理性癒痕、风湿性疾病、缺血性心脏病等，尤其肿瘤生长与其内部的血管新生具有密不可分的联系。研宄血管新生的机理对于治疗上述血管新生相关疾病具有重要临床意义。圆柱瘤病分子（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｍａｔｏｓｉｓ，ＣＹＬＤ）对血管新生的作用及其机理还不清楚。ＣＺＬＤ是一种抑癌基因一，该基因的突变可以导致人类圆柱瘤病。ＣＹＬＤ作为种去泛素化酶，能够通过抑制ＮＦｋＢ通路下调紀基因的表达，从而对炎症反应等产生抑制）作用。有研宄报道采用ＲＮＡ

5、ｉ技术下调ＣＴＺＺ的表达后，血管内皮细胞（Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＶＥＣｓ）迀移及血管新生均受到抑制。但ＣＹＬＤ在血管新生过程中的三个亚型、作用尚有如下问题亟待解决：１．ＣＹＬＤ分为（ＣＹＬＤａＣＹＬＤｂ、ｓＣＹＬＤ），它们在结构上存在差异，这提示我们各同工型的功能可能不同，但目前还没有文献对其具体亚型进行研宄．；２ＣＹＬＤ对血管内皮细胞的作用是否与其去泛素化酶的活性有关有待？ｕｔ验证。本课题将构建ＣＹＬＤａ和ＣＹＬＤａ（无去泛素化酶活性）腺病毒、ＣＹＬＤａ和＂＂＂ＣＹＬＤａ转基因小鼠，在

6、细胞迁移、主动脉环模型、肿瘤血管新生模型、Ｍａｔｒｉｇｅｌ模型上，采用形态学、细胞生物学和分子生物学的方法，明确ＣＹＬＤａ在血管新生中的作用及是否与其去泛素化酶活性相关。实验目的：探讨ＣＹＬＤａ过表达对体外ＶＥＣｓ增殖、迁移及成管的作用，并在体内动物实验验＂＂＂＇证ＣＹＬＤａ对血管新生的作用；同时，加入ＣＹＬＤａ组（不具备去泛素化酶活性，从而失去对ＮＦｋＢ通路的抑制作用），通过比较过表达ＣｒａＤｃ／和过表达两组的实验结果，从而探究ＣＹＬＤａ调控血管新生的作用及这个作用是否与其去泛素化酶活性相关。Ｉ实验方法与结

7、果：？＊＾１）制备ＣＹＬＤａ和ＣＹＬＤａ腺病毒，通过腺病毒感染的方法，使ＶＥＣｓ过表达ＣＹＬＤａ＇ＣＣＫ－８法和细胞划痕损伤分析分别对ＶＥＣｓ的增殖及迁移进行检测，及ＣＹＬＤｃＴ’釆用并在三维胶原中检测感染腺病毒后的ＶＥＣｓ管腔形成能力。＂＂＇２）分别制备ＣＴＬＤｆｌ转基因小鼠、ＣｙＺＤｃｊ转基因小鼠及ＷＴ野生型小鼠的乳腺癌及肺癌模型，，观察三组小鼠的乳腺癌组织和肺癌组织中血管新生的情况并对所取肿瘤组织进行ＣＤ３１的免疫组化染色，检测血管新生的相对数量。另外，利用向三组小鼠皮下注射Ｍａｔｒｉｇｅｌ的方法以及体外培养小鼠主

8、动脉环血管新生的实验验证ＣＹＬＤａ在体内对血管新生的作用。实验结论：１）ＣＹＬＤａ过表达具有抑制血管新生的作