pgc-1α对鼠视网膜新生血管调控作用的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR774610博士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏PGC．1a对鼠视网膜新生血管调控作用的研究EffectofPGC——laOildevelopmentofretinalneovascularizationinthemouse作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：张枥心临床医学眼科学湘雅医院夏晓波教授答辩委员会主席中南大学二。一四年五月学位论文原创性声明蝶涨万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰

2、写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。。’,f4E者签名：i亟扯日期：互型±_年』月尘日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本

3、声明。作者签名：』丝日期：丝!生年。L月互生日锄签矗日期：尘盟年』月纠日万方数据博士学位论文中文摘要摘要PGC—l伐对鼠视网膜新生血管调控作用的研究第一章PGC．1a在鼠视网膜新生血管模型中的表达目的：建立氧诱导小鼠视网膜新生血管的模型，检测正常鼠和氧诱导视网膜新生血管模型鼠的视网膜PGC．1a的表达，探讨PGC．1a在小鼠视网膜新生血管形成过程中的作用。方法：将鼠龄7天(P7)的健康C57BL／6J小鼠共152只，随机分成正常组(76只)和模型组(76只)，正常组在空气环境中喂养，不做任何处理。模型组在(75士2)％的氧气浓度的密闭氧舱中喂养，5天后鼠龄12天(

4、P12)时出氧舱，出舱后按时间点继续在正常空气环境中喂养，以建立氧诱导小鼠视网膜新生血管模型；正常组和模型组小鼠在鼠龄17天(P17)时行FITC．Dextran血管造影视网膜铺片，观察视网膜血管的形态和变化；石蜡组织切片H&E染色观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。提取各鼠龄正常组和模型组小鼠的视网膜总RNA和总蛋白，采用Real—timePCR及Westernblot技术检测视网膜各时间点组织中PGC．1a的表达水平。结果：视网膜铺片显示：正常组小鼠视网膜血管清晰，走行规则，无新生血管生成；而模型组视网膜有大量新生血管生成及明显的荧光素渗漏和无灌注区出现

5、；石蜡组织切片显示：模型组中有大量的新生血管内皮细胞核突破视网膜内界膜。模型组中视网膜PGC．1etrnRNA万方数据博士学位论文中文摘要和蛋白质的表达水平随着缺氧时间的延长而逐步上调，在P17时表达量上调明显；结论：在氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型当中，PGC—let的表达量逐渐上调，其表达趋势与视网膜新生血管生成的时间基本同步。证明PGC．1a参与调控视网膜新生血管的形成过程。第二章PGC．1asiRNA调控鼠视网膜新生血管的形成目的：检测PGC．1asiRNA对视网膜新生血管形成的抑制作用，研究PGC．1et调控视网膜新生血管的作用，为视网膜新生血管性疾病提

6、供新的治疗靶点。方法：将鼠龄7天(P7)健康的C57BL／6J小鼠共184只，随机分成PGC-letsiRNA注射宝H(45只)、阴性对N坌H(45只)、模型对N坌H(49只)、和正常组(45只)。正常组在空气环境中喂养，不做任何处理。PGC-letsiRNA注射组、阴性对照组和模型对照组小鼠放置于(75士2)o／60的氧气浓度密闭舱中喂养5天，在鼠龄12天(P12)时出舱，出舱后继续在空气环境中喂养，建立氧诱导的视网膜新生血管的模型；其中，PGC．1etsiRNA注射组在P13时予以玻璃体腔内注射lulPGC．1etsiRNA．脂质体混合物；阴性对照组则在P13

7、时予以玻璃体腔注射1ulsiRNA阴性对照．脂质体混合物；模型对照组不做任何处理。各实验组在鼠龄l7天(P17)时采用Real．timePCR和Westemblot技术观察小鼠视网膜PGC—letmRNA、蛋白质和VEGFmRNA、蛋白质的表达变TT万方数据博士学位论文中文摘要化；各组小鼠左心室行FITC．Dextran灌注并视网膜铺片，观察新生血管的形态和分布变化；视网膜石蜡组织切片H&E染色用以观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量；免疫荧光检测PGC．10【和VEGF的表达。结果：PGC．1asiRNA注射组的视网膜PGC．1amRNA和蛋白质表达与

8、模型对照组