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1、Akt抑制剂对氧诱导视网膜新生血管形成的作用目的:观察Akt抑制剂(1L-6-hydroxymethyl-chiro-inositol2-(R)-2-O-methyl-3-Ooctadecylcarbonate)X'J*低氧环境下视网膜新生血管形成的抑制作用，探讨Akt活性的抑制对于新牛血管抑制的作用。方法：将鼠龄为7天的C56BL/6小鼠14只置于浓度为75%±2%高氧舱环境屮生活5天，然后返回正常氧环境中。小鼠于出氧舱后当口被随机分为实验组和对照组，实验组小鼠玻璃体腔内注射1.5ulAkt抑制剂，对照组小鼠玻璃体腔内注射1.5ulPBSo在P17天，实
2、骑组和对照组小鼠FITC-dextran左心室造影视网膜铺片了解视网膜的血管形态的改变。结果：视网膜铺片结果显示实验组视网膜新牛血管的面积/全视网膜面积为6%,对照组的视网膜新生血管的面积/全视网膜面积为14%,差异具有统计学意义(PvO.Ol)。但两组的无灌注区无明显差异(实验组无灌注区面积/全视网膜而积为21%,对照组无灌注区面积/全视网膜面积为22%,P>0.05)结论：在缺氧环境下运用Akt抑制剂能够抑制视网膜新生血管的发生，但不减少无灌注区。视网膜新生血管性疾病，如早产儿视网膜病变(ROP)、增殖型糖尿病视网膜病变、Ealet病、继发性的新生血管
3、性青光眼、缺血型的视网膜静脉阻塞等等,在全世界范围内，这些都是最主要的导致眼盲的疾患，已经引起了人们非常广泛注意。Akt是一种分子量约为57KD的蛋白质，它属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。越来越多的证据表明Akt与新牛血管的形成之间存在紧密的联系。内皮一氧化氮合酶(eNOS)是一种己知的Akt的下游靶物质，最近的研究表明Akt能够磷酸化eNOS,导致其持续的激活⑴，从而促进新生血管的形成2"】。而且，新的研究显示Akt能够调节体内或体外缺氧诱导的VEGF的表达〔"],并且VEGF所诱导的血管内皮细胞的移行需要Akt的激活⑺。Akt参与了抗细胞凋亡信号通路，
4、从而能够促进血管内皮细胞的的生长凶。总之，Akt作为一个“总开关"，控制着重要的细胞功能，包括增殖、凋亡、代谢和转导，它己经被越来越重视做为病理性血管形成治疗的有效方法⑼。Akt抑制剂124005是一种新型Akt抑制剂,化学名lL-6-hydroxymethyl-chiro-inositol2-（R）-2-O-methyl-3-Ooctadecylcarbonate,化学式为C30H5Q0，分子量为578.8u,其选择性抑制Akt的IC50为5umol/L,明显小于抑制PI3K的IC50值90umol/LUOJo基于以上，在本课题研究中，我们首先建立氧诱导
5、视网膜病变（oxygeninducedretinopathy,OIR）模型鼠，通过玻璃体腔注射的给药方式，观察Akt抑制剂对视网膜新生血管的抑制作用，从而更深一步的阐明Akt在视网膜新生血管形成屮的调节作用，为治疗视网膜新生血管性疾病提供一定的理论依据。1,材料与方法1,1主要实验动物及试剂FITC・Dextran（分子量2xl06,美国Sigma公司），C57BL/6J小鼠（清洁级，中国科学院上海实验动物中心），Akt抑制剂（德国Merck公司），多聚甲醛（湖北大学化工厂），无水乙醇（湖北大学化工厂）1,2小鼠视网膜新生血管动物模型的建立和玻璃体腔内注射
6、Akt抑制剂及PBS选取鼠龄为出生第7天（P7）的C57BL/6J小鼠建立氧诱导的视网膜新生血管模型：将鼠龄为P7的C57BL/6J小鼠连同母鼠及测氧仪一起放入密闭的氧舱中，保持氧舱中的压力为常压（每天3次），控制氧浓度为75%±2%,温度23±2”C,每隔2天替换母鼠。室内采用H光灯照明，光照周期为：光照12小时，无光照12小时。5天（P12）后将小鼠放回到空气中继续饲养。在小鼠出氧舱后的当天，即出生后的第12天运用腹腔注射1%戊巴比妥钠麻醉后，用11号手术刀片划开睑裂，并使眼球向外突出。在显微镜下自角膜缘后0.5mm处刺入微量进样器。在实验组4只小鼠将
7、1.5ulAkt抑制剂注入玻璃体腔内；而在对照组4只小鼠将1.5ulPBS注入玻璃体腔内。然后把眼球复位，眼睑盖住角膜。经过高氧处理后,在P17天将眼球取出做FITC-dextran荧光造影视网膜铺片以评估视网膜新生血管及无灌注区。1,3FITC-dextran荧光造影视网膜铺片从实验组及对照组各取P8小鼠4只，采用1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔内充分麻醉小鼠，之后打开实验小鼠的胸腔，充分暴露其心脏，用1ml注射器抽取配置好（50mg：1ml蒸憾水）lmlFITC-Dextran异硫鼠酸荧光素■■右旋糖肝从左心尖底部缓慢进针，行左心室充分灌注，在灌注的后
8、期，用蹑子轻轻的挤压心脏，以帮助心脏充分灌注，使视网膜血管造影充分
