connexin43过表达对u251细胞生长迁移及凋亡作用的研究

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1、Connexin43过表达对U251细胞生长迁移及凋亡作用的研究EffectandmechanismofConnexin43OverexpressionongrowthmigrationandapoptosisofU251cell作者姓名：张兴东专业名称：人体解剖与组织胚胎学指导教师：刘海岩副教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月26日中文摘要缝隙连接是相邻细胞间的直接连接，细胞质可以通过缝隙连接通道直接联系在一起。缝隙连接直接调解代谢产物、离子从一个细胞运输到另一个细胞内。缝隙连接蛋白43（Connexin43，Cx43）在中枢神经系统

2、星型胶质细胞中高表达，而最常见的星形细胞瘤中的表达常常是降低的。有研究认为Cx43表达的降低将会有利于胶质瘤细胞的生长。本研究在建立胶质瘤U251过表达Cx43基础上，通过细胞增殖实验，细胞迁移实验（Migrationassay），RT-PCR（Reversetranscription，PCR）和WesternBlot等实验方法，分析Cx43对胶质瘤U251在生长，迁移和凋亡方面的作用和影响。为胶质瘤的治疗及耐药机制的研究提供新的思路和方法。1．Cx43对细胞生长的影响U251和Cx43过表达U251细胞分别计数，10%FBS+IMDM培养基种植

3、到24孔板，培养7天，每隔24h消化细胞，取均值进行细胞计数。实验结果发现，U251和Cx43-U251细胞在4-5天时生长迅速，在6-7天时细胞生长趋于平缓。两种细胞在1-4天时生长差别不大，在5-7天时U251细胞增殖远大于Cx43-U251细胞具显著差异。实验结果表明，过表达Cx43对U251细胞增殖具有一定的影响。Cx43对U251细胞生长的抑制作用有可能与细胞周期调解蛋白相关。2.Cx43对细胞迁移的影响本部分实验拟检测Cx43对胶质瘤细胞迁移能力的影响。划痕实验显示，Cx43过表达U251细胞在修复划痕过程中细胞的运动性更有方向性（指

4、向性），正常U251细胞在划痕修复时间和细胞运动性上与Cx43过表达U251具有显著差别。观察发现，Cx43过表达U251细胞划痕处迁移过程中细胞自身形态发生改变。与U251细胞相比，Cx43过表达U251细胞骨架更为伸展，由多角形变为狭长的梭形。实验结果表明，Cx43过表达可以促使细胞更快修复划痕，增强了细胞迁移I能力。脑胶质瘤的浸润性生长是临床治疗难点，Cx43有可能是通过与细胞骨架蛋白之间相互作用来影响细胞迁移。3.Cx43对细胞凋亡的影响目前对胶质瘤的治疗多采用手术、放化疗综合治疗方案。TMZ因为具良好疗效而被广泛使用。实验证明1000u

5、MTMZ诱导胶质瘤发生凋亡。为进一步阐述Cx43是否参与TMZ诱导胶质瘤凋亡，采用U251和Cx43过表达U251细胞组，检测了Cx43，Caspase-3，Bcl-2和Bax的表达水平。实验结果显示:Cx43过表达组U251Bax/Bcl-2比值远低于U251组比值，具统计学差异（p<0.05）。Cx43过表达U251细胞中Bcl-2表达增多，Bax表达降低，Bax/Bcl-2比率显著降低；Cx43过表达U251细胞中Caspase-3表达明显降低。结果表明，Cx43可能是通过线粒体通路影响细胞凋亡。综上所述，Cx43具有可抑制U251细胞的增

6、殖，促进细胞迁移，抵抗由TMZ诱导细胞凋亡的作用。关键词：缝隙连接蛋白43，胶质瘤，迁移，凋亡IIAbstractGapjunctionsarespecializedcell–celljunctionsthatdirectlylinkthecytoplasmofneighboringcells.Theymediatethedirecttransferofmetabolitesandionsfromonecelltoanother.Expressionofastrocyticgapjunctionprotein,connexin43(Cx43),i

7、softenreducedinastrocytomas,themostcommonneoplasiaofthecentralnervoussystem(CNS)inadults.Supportedbyanumberofstudies,theglobaldecreaseofCx43expressionappearstobeadvantageousforthegrowthofgliomacells.Ourstudyisbasedonover-expressingCx43togliomaU251,researchingtheeffectandinflu

8、enceofgrow,migrationandapoptosiswhenover-expressingCx43togliomaU251b