pten过表达及突变对肝星状细胞黏附与迁移的影响

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1、中图分类号：R575.2论文编号：HBLG2015-250UDC：密级：公开硕士学位论文PTEN过表达及突变对肝星状细胞黏附与迁移的影响作者姓名：任昌镇学科名称：内科学研究方向：消化系统疾病学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年5月4日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：郝礼森主任医师单位：华北理工大学附属医院论文评阅人：关战军教授单位：上海和睦家医院程艳副教授单位：华北理工大学附属医院论文答辩日期：2015年6月5日答辩委员会主席：陈乃耀教授关键词：肝纤维化；肝星状细胞；PTEN；黏附；迁移唐山华北理工大学2015年6月EffectsofPTEN

2、OverexpressionandMutationonAdhesionandMigrationinHepaticStellateCellsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyRenChangzhen(InternalMedicine)Supervisor:M.D.HaoLisenJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人

3、在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流

4、。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的探讨过表达的野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosomeTen，PTEN）及其突变体G129E基因（仅保留蛋白磷酸酶活性而丧失了脂质磷酸酶活性）对体外培养的活化肝星状细胞（hepaticstellatecells，HSC）黏附与迁移的影响。方法利用293A细胞扩增实验所需的腺病毒（Ad-PTEN、Ad-G129E、Ad-GFP）

5、，并测定滴度；以腺病毒为载体将具有双重特异性磷酸酶活性的野生型PTEN基因及仅保留了蛋白磷酸酶活性的PTEN突变体G129E基因转染体外培养的活化大鼠HSC（HSC-T6株）；采用Westernblot检测HSC的PTEN蛋白表达；应用甲苯胺蓝染色法及MTT比色法测定HSC黏附能力；采用细胞划痕修复实验测定HSC的平面迁移能力；应用Transwell小室测定HSC的跨膜迁移能力。所有资料均应用Excel2003建立数据库，采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA），组间比

6、较采用LSD检验，P＜0.05即认为有统计学意义。实验分组如下：①对照组（Control组）：病毒转染时以DMEM基础培养基代替腺病毒；②空病毒组（Ad-GFP组）：转染表达绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）的载体空病毒；③PTEN重组腺病毒组（Ad-PTEN）：转染携带野生型PTEN基因并表达GFP的重组腺病毒；④G129E重组腺病毒组（Ad-G129E组）：转染携带G129E基因并表达GFP的重组腺病毒。结果1通过反复感染293A细胞的方法，获得实验所需腺病毒液Ad-GFP、Ad-PTEN及Ad-G129E，其滴度分别为：1.

7、6×109pfu/mL、1.3×109pfu/mL、1.4×109pfu/mL。2M.O.I.值100时，腺病毒感染HSC后48h，计数GFP荧光阳性表达细胞，测的Ad-GFP、Ad-PTEN及Ad-G129E各组腺病毒感染率均＞80%。3腺病毒转染后48h，应用Westernblot技术检测各组HSC的PTEN蛋白表达显示：Ad-PTEN组（1.08±0.07）、Ad-G129E组（0.97±0.04）明显高于Control组（0.56±0.05）及Ad-GFP（0.69±0.07），差异有统计学意义（P＜0.05）；而Control组与Ad-GFP组及Ad-