bt cry3aα基因表达载体的构建及农杆菌介导的甘薯茎段遗传转化

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1、分类号：S531密级：UDC：633学号：2111202203广东海洋太#硕士学位论文…•••Bt基因表达载体的构建及农杆菌介导的甘薯茎段遗传转化孔昆指导教师：朱宏波副教授串请学位类别：农学硕士专业名称：作物遗传育种研究方向：植物雄性不育理论与杂种优势利用学院名称：农学院中国•湛江2015年6月嗲像猞弍答辦養粟会钽成导师:时间：学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所馭得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的

2、研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：年Z月/曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在______年解密后适用本授权书。2、不保密^(请在以上相应方框内打“V”)作者签名

3、:年6月3曰导师签名:Btcry3Aa基因表达载体的构建及农杆菌介导的甘薯茎段遗传转化摘要甘薯（IpomoeabatatasLam.）是世界上重要的农作物和工业作物，又兼具抗癌、保健的功效，因此在全世界广泛种植。甘薯害虫种类多样，危害方式不尽相同，每年因害虫造成甘薯减产给国家带来的损失无法估计。而常规的甘薯品种缺乏对田间害虫的天然抗性，依靠常规育种手段也难以解决上述问题。目前控制甘薯害虫的手段多以化学杀虫剂为主，既提高了生产成本又对环境产生污染，并且化学物质的残留会对食用者造成安全隐患。因此，亟需发现并利用一种新型的

4、手段来培育甘薯抗虫新品种。Bt基因被认为是一种针对害虫有特异性杀虫活性，而对人、畜等非目标生物无害的抗虫基因，因其优良的特性，目前在世界范围内广泛应用。Btcry3Aa基因对鞘翅目昆虫有专一杀灭活性，将该基因导入到甘薯中，培育并获得转基因甘薯可以对鞘翅目害虫甘薯小象甲产生一定抵抗作用，以达到抗虫并增加甘薯产量的目标。本研究的主要结果是：，1.Btcry3Aa基因序列的上游5端引入了KpnI、BamHI限制性内切酶酶切位点，和PTD接头，在下游3端引入了SalI酶切位点，且利用甘薯密码子偏好性对cry3Aa进行改造后于

5、公司合成。2.合成后的基因经酶切、连接、转化等步骤最终获得双元表达载体pCAMBIA1301-cry3Aa与pCAMBIA1301-PTD-cry3Aa。3.通过农杆菌介导的不经植物组织培养阶段的甘薯遗传转化体系的探索，初步建立了一种适合广薯87号甘薯品种的转化策略，在菌液OD600=0.4，侵染时间10min，AS浓度在25-50mg/L之间，Carb浓度为200mg/L时，获得甘薯阳性株的机率最大。4.转化后植株长出的新叶片利用PCR鉴定。结果表明在检测的7株转cry3Aa的植株上，共有2株阳性株；在检测的11株

6、转PTD-cry3Aa的植株上，共有3株阳性株。关键词：cry3Aa基因，广薯87号，甘薯小象甲，载体构建IConstructionofBtcry3AageneexpressionvectorandAgrobacteriumtumefaciens-mediatedgenetictransformationofsweetpotatostemsAbstractSweetpotato(IpomoeabatatasLam.)isanimportantcropandindustrialcropsintheworld,andbo

7、thfunctionofanticancer,healthcare.Itiswidelycultivatedthroughouttheworld.Sweetpotatopestspeciesdiversity,endangertheexactsamewayeveryyearduetothelossofproductionofsweetpotatopestscausetobringthecountrycannotbeestimated.Thelackofconventionalsweetpotatovarietiesi

8、nthefieldofnaturalresistancetopests,itisdifficulttorelyonordinarybreedingmethodstosolvetheseproblems.Atpresent,morethanameansofcontrollingpestsofsweetpotatorelyonchemicalpes