两种甘薯病毒外壳蛋白基因表达载体的构建及农杆菌介导甘薯遗传转化

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1、分类号：Q87密级：UDC：581.2学号：201050023221广东海洋大学硕士学位论文两种甘薯病毒外壳蛋白基因表达载体的构建及农杆菌介导甘薯遗传转化朱明兰指导教师：于莉教授朱宏波副教授申请学位类别：农学硕士专业名称：植物病理学研究方向：资源微生物利用与生物技术学院名称：农学院中国·湛江2013年6月II学位论文答辩委员会组成主席：委员：导师：时间：广东海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做

2、出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在______年解密后适用本授权书。2、不保密□。√（请在以上相应方框内打“√”）作者签名：年月日导师签名：年月日两种甘薯病毒外壳蛋白基因表

3、达载体的构建及农杆菌介导甘薯遗传转化摘要甘薯（Ipomoeabatatas(L)Lam.）是我国重要的粮食与经济作物，主要用于食品、蔬菜、饲料及工业等行业。中国是世界上最大的甘薯生产国，种植面积约达550万公顷，产量约为1.06亿吨左右。病毒病是导致甘薯产量降低和种性退化的主要原因之一，目前对甘薯病毒病尚无有效的防治方法。由于缺乏抗原材料、育种周期长及甘薯杂交不亲和性等原因，使杂交育种培育抗病毒品种比较困难，所以应用转基因技术来培育抗病毒甘薯品种显得尤为重要。已报导侵染甘薯的病毒约有20种，甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）和甘薯G病毒（SPVG）是其中两种重要的

4、病毒。本研究主要得到如下结果：1、植物表达载体pCAMBIA1301VGCP的构建根据SPVG-HN（GenBank登录号为DQ399861）CP基因cDNA序列设计引物SPVG-F/R，通过RT-PCR得到目的基因并测序。测序结果表明扩增的片段与报道的序列同源性为98.2%。同时双酶切质粒pMDVGCP与pCAMBIA1301并将它们连接，成功构建出植物表达载体pCAMBIA1301VGCP。2、植物表达载体pCAMBIA1301VGCP对甘薯的转化以甘薯品种“台农71”与“紫罗兰”的茎段为受体，通过农杆菌介导的转化方法，得到32株转基因植株，其中“台农71

5、”有13株，“紫罗兰”有19株。3、植物表达载体pCAMBIA1301-SL的构建根据SPFMV（GenBank登录号为D86371）CP基因cDNA序列设计2对引物，通过RT-PCR扩增出目的基因并测序。测序结果表明扩增的片段与报道的序列同源性为96.8%。通过酶切与连接构建出中间载体pMD18-SL，同时双酶切质粒pMD18-SL与pCAMBIA1301并将它们连接，成功构建出植物表达载体pCAMBIA1301-SL。4、植物表达载体pCAMBIA1301-SL对甘薯的转化以甘薯品种“台农71”、“紫罗兰”和“广菜薯1号”的茎段为转化受体，通过农杆菌介导的

6、转化方法，得到36株转基因植株，其中“台农71”有8株，“紫罗兰”有16株，“广菜薯1号”有12株。关键词：甘薯G病毒，甘薯羽状斑驳病毒，RNA干扰，载体构建，遗传转化IConstructionoftwosweetpotatocoatproteingeneexpressionvectorandAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformationofsweetpotatoAbstractSweetpotato（Ipomoeabatatas(L)Lam.）isanimportantfoodandmaterialcropino

7、urcountry,andmainlyusedasfood,vegetables,feedandindustrialmaterials.Chinaisthelargestsweetpotatoproducercountryintheworld,withitstotalgrowingareaandyieldreaching5.5millionhaand106millionmetrictons,respectively.Viraldiseasesconstituteamajorhindrancetothedevelopmentandhighlyprofitable

8、productionoftheswee