a20蛋白质o-glcnac修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症、反应应答的影响及机制

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1、rf换乎欄娘聲4那说.V.*62..分类号学号-瞧.j‘‘‘每‘、^C:密级.乃又处.'‘/,:,,^;!攀帮^^^‘''?.v峡...;.:<^^S;*讀;硕去学化4^丈霄去娘批類三義接(学术型)^巧尚'A20蛋白质O-GlcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症^、,反应应答的影响及机制.-蘇姚丹、■f'I-/.‘':巧.指导教师姓名:张振刚教授,扬州大学,江苏扬州、225009,申请学位级别:硕去学科专业名称;内科学

2、y!论文提交日期:2015年4月论文答辩日期:2015年5月义/,1!学位授予单位;扬州大学学位授予日期:2015年6月匈f.答辩委员会主席';严金川教授佔哉V'.、^.;式''1、,、‘".鄉赤C;麥歷年-Iv巧持黎娜碑‘哪"麵紀逆个游論d嚇終姚丹A20蛋白质0-GlcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症反应应答的影响及机制1目录中:摘要2英文摘要4*金獅6中英文对照缩略词表7前胃8材料与方法11结^20论29

3、结论33参考舖34综述384熟渐6攻读硕±学位期间发表论文目录47扬州大学学位论文原创性声明和版权使用授权书48扬州大学硕±学位论文,-GA20蛋白质0lcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症反应应答的影响及机制中文摘要【目的】---A20的O-GcNAc(7V己醜葡萄糖胺)修饰对NFkB信号通路本研究旨在探讨l氧连-20的调节效应,阐明细胞内蛋白质0GlcNAc修饰对A活性的影响及其在抗炎效应中的-作用,从而明确蛋白质0GlcNAc修饰提供血管

4、保护效应的关键靴点。【方法】(1)分别给予大鼠主动脉平滑肌细胞(rataorticsmoo化musclecells,RASMCs)转--染空载体腺病毒D-NULL)、A20消减基因的腺病毒(ADshA202)W及携带A20(A携带---Thit50nmol/(ADA20IRES)l)过表达基因的腺病毒后,再给予ameG(1m预处理1小---6TNFa(10n/m,,eateRTPC艮l)处理提取RNA样本采用rlim时,接着给予g小时检MCP-1、P-select测炎症因子in的mR

5、NA表达。----ASMCAD-NULL、ADshA202及ADA20(2)分别给予Rs转染:IRES后,给予-B(150)1,Th,oden小室上腔iametG预处理nmol/ml小时随后将细胞接种在y下腔注入-)a(,24,,含有TNFlOng/ml的DMEM继续脾育小时细胞经固定、染色、漂洗随机选择0。1个视野计数迁移至小室底面的细胞数量-----化ES(3)分别给予ADNULL、ADshA202及ADA20,接RASMCs转染种至%t-G150/m),0孔板,

6、饥饿细胞,给予Thiame(nmoll预处理1小时巧给予1%FBS解育24。小时,采用CC8试剂盒检测细胞的增巧情况IC【结果】---MCsGG(1)在转染ADNU1X的RAS,Thiamet预处理快速提高细胞0lcNAc修----1PltiTNFa诱导的炎症因子MCP、seecn表达-饰水平能够显著抑制;在巧染ADshA202e--的民ASMCs,A20蛋白表达明显减少,而ThiamtG预处理不巧能够抑制TNFa诱导的---20炎症因子表达ADA20化ES可思著增加A蛋白衷达,Thiamet

7、G预处理仍然能;转染-a诱导的炎症因子表达够抑制TNF。--SMC-(2)在转染ADNULL的RAs,ThiametG预处理快速提高细胞0GlcNAc修---a诱导的民ASMCs迁移shA202SMC饰水平能够显著抑制TNF;在转染AD的RAs,--Tht-G预处理不再能够抑制TNFa诱导的RASMCs迁移而在转染ADA2(MRE;iameS的-RASMC-a诱导的RASMCs迁移。s,ThametG预处理仍然能够抑制TNFi--SM-,etG(3)石躬染ADNULL的RACsThiamG预

8、处理快速提高细胞0lcNAc修姚丹A20蛋白质0-GlcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症反应应答的影响及机制3RASMCs-hA20-2s饰水平能够显著抑制血清诱导的增殖;在转染ADs的RASMC,消减ame-A20蛋白表达可废除ThitG对血清诱导RASMCs增殖的抑制;相反,过表达A20蛋Th-白并不影

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