虎斑乌贼肌肉糖蛋白分离纯化、结构分析及其抗氧化活性初步研究

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1、密级：公开中图分类号：边全日制口非全日制翁硕士学位论文专业学位）论文题目：虎斑乌賊肌肉耱蛋白分离纯化、结构分析及其抗氣化活性初步研究作者姓名：戴宏杰专业学位类别：工程顿士专业学位领域：食品工程研究方向：农产品加工与贮藏指导教师：郑小林陈道海提交日期：年月DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster'sDegreeofEngineeringSTUDYONTHEEXTRACTION,PURIFICATION,STRUCTUREANDANTIO

2、XIDATIONOFGLYCOPROTEINFROMSEPIAPHARAONISMUSCLEAuthor:HongjieDaiMajor:FoodEngineeringSupervisor:XiaolinZhengDaohaiChenJan.2015CollegeofFoodScienceandBiotechnology,ZhejiangGongshangUniversityHangzhou,310018,P.R.China浙江工商大学硕士学位论文虎斑乌載肌肉耱蛋白分离纯化、结构分析及其抗氣化活性初步研究摘要虎

3、斑乌贼是一种大型头足类动物，主要生活在南海海域，具有口味鲜美、对饵料消化充分、养殖潜力大、对环境适应性强、生长迅速等特点，同时蛋白质含量高，比例高，具有较高的营养价值和药理功效。研宄表明，从乌贼墨、乌贼壳中提取的多糖、蛋白复合物等物质显示出良好的抗肿瘤活性，从与乌贼相类似的海洋动物中提取的多糖、蛋白质和萜类等物质也具有抗肿瘤、抗衰老、增强免疫力、抗高血压、抗氧化等作用。为了更好地利用这些活性物质，需要对其进行提取、分离纯化、结构分析、生物活性方面的研究。本课题以虎斑乌贼肌肉为试验材料，研究了虎斑乌贼肌肉糖蛋白的

4、提取、脱蛋白、分离纯化、初步结构及其抗氧化活性。主要研宄结果如下：釆用响应面法优化虎斑乌贼肌肉糖蛋白（的盐法提取工艺。研究了浓度、液料比、提取时间和提取温度对得率的影响，在单因素实验的基础上，通过四因素三水平的设计优化，得到的最佳提取工艺参数是浓度液料比提取时间为，提取温度为°，在此条件下，得率为。浙江工商大学硕士学位论文采用正交实验优化法脱蛋白工艺，同时测定硫酸铵沉淀所需饱和度以及的等电点。结果表明采用法脱蛋白得到的最佳工艺参数为：样液与试剂的比例为氯仿与正丁醇的比例为振摇时间，静置时间，脱蛋白次，此时脱蛋白

5、率可达到硫酸铵溶液饱和度为时沉淀效果最佳；的等电点为。经离子交换层析和分子筛层析后，得到两个不同组分和采用高效凝胶渗透色谱（和聚丙烯酰胺凝胶电泳（验证和的纯度，结果表明为均一组分，其分子量分别为和。对比消去反应前后紫外扫描图谱，显示和都有糖肽键的存在；红外光谱结果表明和中存在糖和蛋白复合物的特征吸收峰，糖苷键类型都为吡喃型；氨基酸分析结果表明，和中富含酸性氨基酸，天冬氨酸和谷氨酸占总氨基酸含量的百分比分别为和和中含量最高的氨基酸均为谷氨酸，其含量分别为和；采用法检测到和中的单糖组成主要为岩藻糖、葡萄糖和甘露糖，

6、其中葡萄糖含量最高，分别为和通过测定的还原力以及对超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的清除能力，考察的抗氧化活性。结果显示随着浙江工商大学硕士学位论文质量浓度的增加，其还原力以及对超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的清除能力逐渐增强，呈现良好的量效关系，据此可认为具有一定的抗氧化活性。关键词：虎斑乌贼；糖蛋白；分离纯化；结构分析；抗氧化浙江工商大学硕士学位论文，浙江工商大学硕士学位论文—°，浙江工商大学硕士学位论文浙江工商大学硕士学位论文浙江工商大学硕士学位论文目录第章引言乌贼研宄进展乌贼简介乌贼的营养价值

7、乌贼的药用价值虎斑乌贼的养殖现状糖蛋白概述糖蛋白的定义和分布糖蛋白的组成和结构海洋生物糖蛋白的生物活性本课题的研究背景、意义及研宄思路第章虎斑乌贼肌肉糖蛋白提取工艺优化材料与伩器实验材料实验仪器实验方法提取方法糖蛋白含量的测定单因素实验响应面试验设计结果与分析单因素结果与分析响应面结果与分析舰屑第章虎斑乌贼肌肉糖蛋白的脱蛋白工艺优化材料与伩器实验材料浙江工商大学硕士学位论文实验仪器实验方法蛋白质、多糖含量测定法脱游离蛋白硫酸按沉淀条件的选择等电点测定结果与分析单因素结果与分析正交试验结果与分析脱蛋白次数对脱蛋白

8、效果的影响硫酸铵沉淀条件的选择等电点测定讨论小结第章虎斑乌贼肌肉糖蛋白的分离纯化及鉴定材料与伩器实验材料实验仪器实验方法虎斑乌贼肌肉糖蛋白纯化流程离子交换层析分子蹄层析纯度及分子量检测结果与分析离子交换层析分子蹄层析纯度及分子量检测结果職浙江工商大学硕士学位论文第章虎斑乌贼肌肉糖蛋白的结构分析材料与伩器实验材料实验仪器实验方法糖肽键特征分析红外吸收光谱分析氨基酸组成分析单糖组成分析结果