糖尿病创口愈合中RAGE的表达与损伤时间关系的研究

《糖尿病创口愈合中RAGE的表达与损伤时间关系的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R89单位代码：10343学号：151006851硕士学位论文论文题目:糖尿病创口愈合中RAGE的表达与损伤时间关系的研究研究生姓名：季心怡学科专业：法医学（法医病理学）类型：学术型指导教师：范琰琰副教授二O一八年三月温州医科大学硕士学位论文论文题目:糖尿病创口愈合中RAGE的表达与损伤时间关系的研究答辩委员会主席：周韧教授浙江大学医学院答辩委员会成员：陈国荣教授温州医科大学附属第一医院包其郁教授温州医科大学检验医学院论文答辩日期：2018年5月19日2温州医科大学硕士学位论文糖尿病创口愈合中RAGE的表达与损伤时间关系的研究目录一、摘要中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6二、论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26四、参考文献参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26五、附录在校期间发表文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

3、1独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯583温州医科大学硕士学位论文糖尿病创口愈合中RAGE的表达与损伤时间关系的研究中文摘要目的准确推断创口形成时间及寻找与损伤时间具有良好相关性的指标是法医病理学的重要课题。目前中国成年人的糖尿病患病率已达到11.6％，因此在法医学检案中对糖尿病创口形成时间的推断变得日益重要。然而，糖尿病创口和正常创口之间呈现不同的修复过程，推断正常创口形成时间的指标可能不适宜于糖尿病创口。研究表明，晚期糖基化终产物受体（receptorforadvancedglycationendproducts，RAGE）与糖尿病创口愈合密切相关。本研究旨在明确皮

4、肤切创愈合过程中RAGE的表达与分布特征，探讨RAGE在糖尿病创口形成时间推断中的应用价值。材料和方法45只8周龄雄性糖尿病小鼠（C57BL/KsJ-db/db）小鼠与45只同龄的雄性野生型小鼠（C57BL/KsJ）分别作为糖尿病组和正常对照组，均进一步随机分为8个切创实验组和1个未切创组（每组5只小鼠）。实验组使用腹腔注射戊巴比妥钠麻醉小鼠，剃毛备皮，通过无菌操作使用手术刀在小鼠背部中央做一长1.5cm的皮肤全层纵行切口。实验组分别于伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d、14d处死小鼠，取创口及其周围处1.5cm×2.0cm大小的皮肤。未切创组取相同部位、同等大小的皮肤。取

5、下的皮肤样本从创口中间切开分为两部分，一部分用于HE染色、免疫组织化学染色及双重荧光共定位，另一部分用于Westernblot。HE染色观察创口组织学改变。免疫组织化学染色观察RAGE的细胞表达。双重免++疫荧光技术检测RAGE在巨噬细胞（F4/80细胞）或成纤维细胞（HSP47细胞）中的表达，统计创口中巨噬细胞、成纤维细胞数量，并计算RAGE在巨噬细胞、成纤维细胞中的阳性率。Westernblot技术检测创口中RAGE蛋白表达的相对水平，应用Scion图像分析软件进行谱带分析和光密度值测定，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为内参。全部数据采用SPSS17.0forWindows

6、统计软件进行统计学分析，数据采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果（1）大体观察：与对照组相比，糖尿病组的创口收缩和愈合延迟。（2）HE染色：与对照组相比，糖尿病创口中浸润的炎细胞在伤后6h-3d相对缺乏，但在伤后5-14d显著增加。此外，和对照组相比，糖尿病组伤后3-14d4温州医科大学硕士学位论文创口的成纤维细胞密度较低，伤后14d形成的瘢痕组织较薄、较稀疏。（3）免疫组织化学染色：在未损伤的对照组和糖尿病组皮肤，RAGE主要表达在表皮、毛囊、皮脂腺及少数真皮内的细胞。在对照组和糖尿病组，伤后6-12h少数PMNs表达RAGE

7、，伤后1-3d可见MNCs表达RAGE，伤后5-14d主要可见MNCs和FBCs表达RAGE。（4）RAGE及F4/80双重免疫荧光染色：和对照组相比，糖尿病组创口伤后+6h-3d浸润的巨噬细胞（F4/80细胞）数量显著减少，而伤后7-14d浸润的巨噬细胞数量显著增多。伤后5-14d，糖尿病组创口的巨噬细胞RAGE阳性率较对照组显著增加；伤后7-10d，糖尿病组创口的巨噬细胞RAGE阳性率大于60%，而所有对照组创口（伤后6h-14