脑挫伤后GFAP和iNOS表达与损伤时间关系的实验性研究

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1、t瞎挫伤后GFAPiNOS表达s损伤对间关系的实验性研究》髓挫伤后GFAP和iNOS表达与损伤时间关系的实验性研究华中科技大掌同济医掌院法医学系研究生王炜煜导师秦启生摘要本实验采用免疫组织化学技术(SABC法)并结合一般病理形态学观察，研究大鼠实验性脑挫伤后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和诱导型一氧化氮合成酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)的表达变化与损伤时间的关系。实验组用落体撞击法形成右顶叶脑挫伤后，按0h、3h、6h、12h、ld、3d、5d、7d不同时间分批处死动物并立即取出全脑：假损伤组仅行开颅手术而不行落体撞击：死后损伤

2、组于处死动物后30分钟行落体撞击。以脑挫伤灶为中心旁开lmm行大鼠全冠状切面取材，常规石蜡包埋，4um切片。作GFAP、iNOS免疫组化染色观察，同时行HE染色对照。采用计算机彩色图像分析技术对染色观察结果作定量统计分析处理。果表明：伤后3h组GFAP阳性表达细胞开始增多，且随伤后存活时间的延长，单个阳性细胞的染色强度和阳性物质面积逐渐增多。伤后ld和5d组单个阳性细胞染色强度达峰值，但在3d时相对邻近组却下降，使呈现一双峰波形(与3h比较p<0．05)，7d达最大值；阳性物质总面积自3h表达增多开始后一直增加，直到7d达高峰。2、伤后12h可见iNOS活性增高，在挫

3、伤灶周围出现阳性染色细华中科技土学日济医学院娃医学系碛士研竟生年主话文义丝丝型兰塑型型塑丝型丝型兰丝胞，并随伤后存活时间的延长，iNOS阳性细胞数目(或阳性物质总面积)逐渐增多，单个细胞染色强度逐渐加深。伤后ld至3d阳性物质总面积达到高峰(与其它各组相比p<0．05)，5d后开始下降p<0．05)，但7d仍维持较高水平；而单个细胞染色强度随伤后存活时间的延长逐在脑挫伤后3h便可检测到，适用于早期脑挫伤时间的推断；而iNOS在脑挫伤后12h开始明显表达，1—3d达到高峰，适用于稍晚期脑挫伤时间的推断。关键词：脑挫伤免疫组织化学损伤时间氧化氮合成酶谛卧胶质纤维酸性蛋白i

4、毽礤oE卜年中科技土学闾许医学院拄}E学蠢硕士研竟生平土论文摹2i共58百《啦挫伤岳GFAP和iNOS表达与损伤砖涵关系的实验性研究》王讳慢AstudyoftherelationbetweentheinjurytimeandtheexpressionofGFAPandiNOSafterexperimentalbraincontusionPostgraduateWangweiyuDirectorQinQishengInthisstudy,immunohistochemicalmethodwasperformedtoobservethechangeofinduciblen

5、itricoxidesynthase(iNOS)andglialfiberillaryacidicprotein(GFAP)staininginthebrainofratafterexperimentalbraincontusion．Therightparietalcortexcontusionwasmadewithfallingimpactinjury．Sham-injuredcontrolratsweresimilarlyduralexposedwithoutimpact．Postmortem-iniuredcontrolratswereproducedbyfal

6、lingimpactinjury30minafterdeath．Thetestofcontrolratswerekilledatvarioussurvivaltime(Oh，№，3h，6h，12h，ld，3d，5d，7d)．Paraffmsections(4um)werecutcoronallyofthewholeratbrainandstainedwithantibodiesofGFAPandiNOS．Thehemotoxylineosin(tiE)stainwasdoneinthemeantime．Thestainingresultsweremeasuredqua

7、ntitativelywithcomputerimaginganalysissystem．Theresultsdemonstratedthat：1．At3hafterinjury,GFAPpositiveastrocytesaroundthewoundwerealreadydetected．TheintensityandtheareaofGFAPpositivecellsincreasedfollowingtheinjurytime．Theintensitycometopeakatldand5d，butislowerat3d，thetwo·peakw