探析低温脂肪酶产生菌的筛选及发酵工艺研究

《探析低温脂肪酶产生菌的筛选及发酵工艺研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、天津大学硕士学位论文低温脂肪酶产生菌的筛选及发酵工艺研究姓名：唐琦勇申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：史清洪;陈蓝天20090501摘要新疆地处我国大西北，存在着很多的低温环境(冰川和高山)，为寻找低温微生物供了理想的采样区域。低温微生物所产的酶大多是低温酶。低温酶能在低澄下有效发挥催化作用的特点，使其在生物工程领域有蓿广泛的应用前景。因此，对低温微生物的研究无论在理论上还是实践上都有重要意义。本研究从来自新疆伊犁和阿勒泰地区的75份土样中分离出产低温脂肪酶的低温菌6株．经初筛和摇瓶复筛确定一株产低温脂肪酶活力较高的蔬株N6-12作为进一步研究的出发菌株

2、。菌株N6-12在完全培养基上20℃培养72h后，菌落白色、圆形、隆起、不透明、表面光滑、湿润、边缘波状。菌体革兰氏阴性、杆状、能运动。常规生理生化测试表明，葭株N6-12兼性厌氧，最适生长温度25℃，40℃以上不生长，氧化酶反应阳性，接触酶反应阳性，不产H2S，明胶液化阳性，水解淀粉阴性，反硝化作用阳性，脂酶阳性，能利用葡萄糖、果糖。经过16SrDNA鉴定，与假单胞菌有97．6％的相似度。结合形态学、生理生化特征和16SrDNA序列分析结果，初步认定菌株N6-12属．丁．假单胞菌属，暂命名为Pseudomonassp．N6-12。对菌株N6-12产的脂肪酶的酶

3、学性质进行了初步研究，结果表明该低温脂肪酶的最适催化湓度为30℃，30℃’F处理120rain，酶活性仍有70％。该酶催化的最适pH6．5，在不同pHF的稳定性试验显示，该酶在pH5．5--．8内均较稳定。金属离子中，Cu2+、Fe升对酶有较大的抑制作用，Na+则对酶有激活作用。在摇瓶发酵水平上，对假单胞菌N6-12的发酵产酶条件进行了研究，确定了其最佳培养基成分及最佳培养条件。研究了不同碳源、氨源、无机盐、产物、底物等冈素对假单胞蘸N6-12产酶的影响，发现玉米浆、豆粕粉、葡萄糖、装填量对产酶的影响较大。对玉米浆、豆粕粉、葡萄糖、装填量四因素各选取三个水平进行

4、正交试验，确定假单胞菌N6-12产酶的最佳培养基成分为玉米浆2％，豆粕粉3％、葡萄塘l％，装填量为50ml／250nd。通过摇瓶发酵试验，确定其最佳培养条件为：25℃，180r／rain，培养45h。在此条件下培养，低温脂肪酶酶活力达7．87U／mL，比优化前提高了76．8％。关键词：低温脂肪酶：筛选：菌株鉴定：假单胞菌；酶学性质；产酶优化AbstractAsoneofidealsamplingareaforcold-adaptedmicroorganisms，therearevariouslow-temtx'ratureenvironmentsinSmkian

5、g．wherewereadoptedforexistenceoflow-temperatureenzyme-producingmicroorganisms．Lowtemperatureellzyxllespe-rformbetterthananyothernormaltemperatureenzyll硷sunderlowtemperature，therebyexhibitingagreatpotentialinbioengineering．Inthisthesis，aswamoflow-temperaturemicroorganismW8$collectedan

6、dcharacterizecLTheactivityoftipaseandfermentationconditionwereoptimizedforfln-therresearchSixlow-temperatureghainsusedinthisresearchworecollectedfrom75soilsamplesintwoSinkiang’dislriclsofHiandAletai．Aftertheprimaryscreenmgalow-temperaturelipaseproducingstrain(namedasN6-12)obtainedwas

7、usedinfollowingresearches．Afterculturedunder20℃for72h,thecolonyofthestrainN6-12onTYEGculturemediumwaswhile，round,uplifted．opaque，smoothandmoist．Thestrainwasgramnegative，rodshapeandlocomotion．TheresultsofbiochemistryandphysiologytestshowedthatthebesttemperatureforitsgrowthWas25"Candth

8、egrowthWasin