麻黄碱对人支气管上皮细胞增殖及表达 eotaxin和il-8的影响

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1、中图分类号：R562.2+5硕士学位论文麻黄碱对人支气管上皮细胞增殖及表达Eotaxin和IL-8的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名李中燕学科、专业内科学导师姓名王宋平教授二Ο一三年五月目录1麻黄碱对人支气管上皮细胞增殖及表达Eotaxin和IL-8的影响…11.1中文摘要……………………………………………………………11.2英文摘要……………………………………………………………41.3前言…………………………………………………………………91.4材料与方法………………………………………………………121.5结果………………………………………………………………23

2、1.6讨论………………………………………………………………311.7结论………………………………………………………………341.8参考文献…………………………………………………………351.9英汉缩略词对照表………………………………………………392致谢………………………………………………………………402.1综述：气道上皮细胞在支气管哮喘发病机制中的研究进展………41麻黄碱对人支气管上皮细胞增殖及表达Eotaxin和IL-8的影响摘要目的：研究麻黄碱对体外培养的人支气管上皮细胞(16HBE)形态、增殖及表达嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、白细胞介素-8(IL

3、-8)的影响，探讨麻黄治疗支气管哮喘的机制。方法：将16HBE细胞株传代培养，选择生长状态良好的第4、5代细胞用于后续实验：⑴将16HBE细胞分别接种于6孔板和96孔板并随机分为5组，分别用含不同浓度(0，150，300，600，1200μg/mL)麻黄碱的培养基培养，培养24、48、72小时后，倒置相差显微镜下观察各组16HBE细胞形态及生长状况；CCK-8检测16HBE细胞增殖情况；⑵将16HBE细胞接种于6孔板并随机分为6组：①空白对照组（A组）：完全培养基培养18h；②麻黄碱组（B组）：含麻黄碱300μg/mL的完全培养基培养18h；③TNF-α组（C组）：含

4、TNF-α20ng/mL的完全培养基培养18h；④麻黄碱+TNF-α组（D组）：含麻黄碱300μg/mL的完全培养基培养1h后加入100ng/mLTNF-α，共培养18h；⑤地塞米松+TNF-α组（E组）：含地塞米松1.4μg/mL的完全培养基培养1h后加入100ng/mLTNF-α，共培养18h；⑥麻黄碱+地塞米松+TNF-α组（F组）：含麻黄碱300μg/mL、地塞米松1.4μg/mL的完全培养基培养1h后加入100ng/mLTNF-α，共培养18h。D、E、F组TNF-α终浓度均为20ng/mL；⑶荧光定量PCR检测各组细胞Eotaxin、IL-8mRNA的表达

5、；免疫荧光法观察各组细胞Eotaxin、IL-8蛋白的表达；双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞上清1液中Eotaxin、IL-8蛋白的浓度。结果：⑴不同浓度（150，300，600，1200μg/mL）的麻黄碱作用于16HBE细胞24h、48h、72小时后，其细胞形态和生长状况与不加麻黄碱（0μg/mL麻黄碱）组比较无明显差异；⑵CCK-8检测结果示：不同浓度麻黄碱作用于16HBE细胞24h，各组细胞的吸光度(OD)值分别为0.97±0.17，0.99±0.24，1.14±0.25，1.11±0.18，0.95±0.18，各组间比较差异无统计学意义（P

6、=0.504）；作用48h各组细胞的OD值分别为1.09±0.43，1.16±0.99，1.16±0.87，1.18±0.56，1.11±0.30，各组间比较差异无统计学意义(P=0.282)；作用72h各组细胞的OD值分别为1.40±0.13，1.39±0.10，1.39±0.16，1.41±0.01，1.40±0.01，各组间比较差异无统计学意义（P=0.18）；⑶荧光定量PCR显示：A至F组细胞EotaxinmRNA的表达量(RQ值)分别为0.99±0.01，0.98±0.02，3.03±0.32，1.82±0.23，1.78±0.02，0.97±0.01，各组

7、间比较差异有统计学意义（P<0.01）。与A组比较，C组的EotaxinmRNA表达量明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；与C组比较，D、E、F组的EotaxinmRNA表达量明显降低，以F组降低最明显，差异均有统计学意义(P均<0.01）。A至F组IL-8mRNA的RQ值分别为0.95±0.05,0.93±0.14,7.18±0.31,4.44±0.24，4.11±0.19，2.97±0.39，各组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。与A组比较，C组的IL-8mRNA表达量明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。与C组比较，D、E、