转座子在耐多药产esbls大肠埃希菌中的分布性探讨

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1、中图分类号：R516；R378.2；R515.9硕士学位论文转座子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布性探讨院（系）、所临床医学院研究生姓名严俊学科、专业内科学导师姓名黄永茂教授二Ο一三年四月1目录1转座子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布探讨………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………81.4材料与方法……………………………………………………91.5结果……………………………………………………………181.6讨论…………………………………………………

2、…………271.7结论……………………………………………………………321.8参考文献………………………………………………………331.9英汉缩略词对照表……………………………………………372致谢……………………………………………………………393转座子介导的细菌耐药机制相关研究进展（综述）………40转座子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布性探讨摘要目的：探讨转座子在耐多药产ESBLs酶大肠埃希菌中的分布及耐药相关性。方法：1.初筛试验：根据美国国家临床实验室标准委员会（TheNationalCommitteeforclinicalLaboratoryStandards,NCCLS）推

3、荐的纸片扩散法[1]（kerby-Bauer纸片扩散法）检测71株大肠埃希菌中头孢噻肟（CTX）、头孢他啶（CAZ）、头孢曲松（CS）、氨曲南（AZT）的耐药性，即抑菌环直径≤22mm的为头孢他啶；抑菌环直径≤25mm的为头孢曲松；抑菌环直径≤27mm的为氨曲南或头孢噻肟；所符合以上标准的定为初筛[2]可疑产ESBLs菌株。2.纸片确认试（Confirmatorytests）：对纸片扩散法所得可疑ESBLs菌株，同时进行药敏试验，每一组药物中加入头孢他啶加克拉维酸和头孢他啶、头孢噻肟加克拉维酸和头孢噻肟，观察在加克拉维酸前后的抑菌环直径变化≥5mm可确认为产ESBLs菌株。3.药敏试[3]验

4、：采用NCCLS推荐的纸片扩散法（Kerby-Bauer法，K-B法），首先采用对大肠埃希菌标准菌株ATCC25922进行质控，再对选定的三类中共6种常用抗菌药物：头孢噻肟(CTX)、链霉素(S)、阿米卡星（A）、左氧氟沙星(LEV)、环丙沙星（CIP)、头孢西丁（F0X）在71株大肠埃希菌耐药性分别进行测定。4.PCR技术：大肠埃希菌的DNA，采用Biospin细菌基因组DNA试剂盒所提取。根据已知的转座子Tn21、Tn501、Tnl、Tn2、Tn3、Tnl000、Tn1548分别设计七对引物，在所得到转座子遗传标记物为阳性的菌株中以大肠埃希菌DNA为反应模板分别进行PCR扩增，阳性扩增长

5、度分别为：Tn21为317bp；Tn501为373bp；Tnl为497bp；1Tn2为479bp；Tn3为323bp；Tn1000为372bp；Tn1548为497bp；将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果。5.基因测序：分别提取所测转座子DNA扩增阳性的菌株的PCR扩增产物用核酸定量仪测[4]得DNA浓度>300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序。结果：1.产ESBLs菌株：在71株大肠埃希菌中通过纸片法初筛后再行确认试验，共检出产ESBLs34株（49.30％）。2.药敏结果：6种抗生素的敏感性在71株大肠埃希菌中全部分布为：耐多药45株(63.38%)、双

6、耐8株（11.27%）、单耐11株(15.49%)、全敏感7株(9.86%)。3.转座子的检出情况：71株细菌中含转座子Tn21、转座子Tn501阳性菌共15株，转座子Tnl、Tn2、Tn3、Tnl000、Tn1548均未检出。3.1转座子在不同耐药模式中的分布：45株耐多药菌株含耐多药转座子菌株13株（28.89%），8株双耐药菌株含转座子双耐药菌株1株（12.50%），11株单耐药菌株含转座子单耐药菌株1株（9.09%），7株敏感耐药模式中未检出。整体比较22CMHX=4.56p=0.032；耐多药与（双耐药+单耐药+全敏感)比较X=4.44p=0.0350。3.2转座子在产ESBLs酶

7、菌株与非产ESBLs酶中的分布：35株产酶菌含转座子的14株（40%），36株非产酶菌含转座子的4株2（11.11%）；该组X=10.372p=0.001。3.3不同转座子模式在各种耐药模式中的分布：转座子Tn21检出7株，其中耐多药6株（85.71%）、双耐0株（0%）、单耐1株（12.5%）；转座子Tn501检出5株，耐多药4株（80%）；双耐1株（20%）Tn21与Tn501重叠3株（100%）,均为耐