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《耐多药大肠埃希菌质粒介导的耐药基因探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、中图分类号：R89；R36；R39硕士学位论文耐多药大肠埃希菌质粒介导的耐药基因探讨院（系）、所临床医学院研究生姓名张正琼学科、专业内科学导师姓名黄永茂教授二Ο一三年四月目录1耐多药大肠埃希菌质粒介导的耐药基因探讨………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………51.4材料与方法……………………………………………………61.5结果………………………………………
2、……………………111.6讨论……………………………………………………………231.7结论……………………………………………………………281.8参考文献………………………………………………………291.9英汉缩略词对照表……………………………………………332致谢……………………………………………………………343大肠埃希菌质粒介导的耐药机制研究进展（综述）………35４学习期间发表的论文复印件…………………………………49耐多药大肠埃希菌质粒介导耐药基因的探讨摘要目的探讨泸州地区质粒介导的产E
3、SBLs(extended–sperectrumβ-lactmases)耐多药大肠埃希菌TEM,SHV,CTX-M,CTX-M-3,CTX-M-22、CTX-M-24等６种耐药酶基因分布状况和对常见抗生素的耐药情况,为临床治疗大肠埃希菌感染合理选用抗菌药物提供理论依据。方法1.纸片扩散法（Kerby-Bauer法，K-B法）：采用美国全国临床检验标准委员会（theNationalCommitteeforclinicalLaboratoryStandards，NCCLS）推荐的该方法测定71株大肠
4、埃希菌对常见的氨基糖苷类，氟喹诺酮类,第三代头孢菌素类抗生素的耐药性。该实验方法要点：将接种于M-H(酪蛋白琼脂)平板上（37℃孵育24小时）的待测细菌制备成与0.5麦氏标准管浊度相同的菌液，并把菌液均匀涂布于灭菌的Mueller-Hinton培养基表面，数分钟干燥后，用无菌镊将药敏纸片分别平贴于M-H培养基表面，每张纸片间距离不少于25mm，纸片中心距离平皿边缘不少于15mm。将贴有纸片的平皿于37℃孵育24小时后，用毫米尺测量抑菌环直径，抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限，抑菌环直径的
5、大小反映了测试细菌对测定抗生素的敏感程度。大肠埃希菌菌标准菌株ATCC25922进行质控对照。2.PCR技术：采用质粒小提试剂盒制备质粒DNA扩增模板；2×TaqPCRMasterMix，6种靶基因PCR扩增体系均为：每一个PCR反应体系共35ul,其中模板7ul，引物1对各5ul，２×TaqPCRMasterMix15ul，ddH2O8ul。PCR反应循环参数为：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；循环结束后72℃再延伸5min。PCR产物
6、进行2%琼脂糖凝胶电泳，以标准菌株ATCC25922进行阴性对照。用紫外线检测仪分析结果并用凝胶成像仪摄像；3.PCR产物测序：PCR产物进行基因测序仪检测碱基序列，与已知的6种基因序列相比较。结果1.药敏1实验结果：临床分离的71株大肠埃希菌中，全敏6株（8.57%）；单耐16株（22.86%）；双耐19株（27.14%）；耐多药30株（42.86%）。2.耐多药单酶基因检测结果：TEM有11株（36.67%）；SHV仅1株（3.33%），所占比例较低；CTX-M有23株（76.67%）；CT
7、X-M-3有21株（70%），CTX-M-22有错误!未找到引用源。9株（12.86%）；CTX-M-24有错误!未找到引用源。24株（80%）。３.耐多药多酶基因检测结果：含2种酶基因同时检出的有30株（其中CTX-M+CTX-M-3有12株（40%）；CTX-M-24+CTX-M有12株（40%）；CTX-M-22+CTX-M-24有6株（20%）,含３种耐药酶基因共检出13株（32.5%），含5种耐药酶基因有1株(3.33%)，未发现上述6种耐药性质粒酶基因3株(10.00%)。CTX-M
8、类基因(包括CTX-M,CTX-M-3,CTX-M-22,CTX-M-24)和SHV,TEM类基因的检出具有统计学意义(P<0.001)。携带CTX-M-24,CTX-M-3,TEM,CTX-M,CTX-M-24+CTX-M基因的菌株对AMK和TM的疗效具有统计学意义（P<0.05）;携带TEM,CTX-M,CTX-M-3基因的菌株对CFX和CPZ的疗效具有统计学意义(P<0.05)。结论泸州地区耐多药大肠埃希菌存在质粒介导的TEM、SHV、CTX-M、CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-
