耐多药大肠埃希菌产ampc酶基因型研究及耐药性分析

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1、中图分类号：硕士学位论文耐多药大肠埃希菌产AmpC酶基因型研究及耐药性分析院（系）、所临床医学院研究生姓名龚强学科、专业内科学导师姓名黄永茂教授二Ο一二年四月目录1耐多药大肠埃希菌产AmpC酶基因型研究及耐药性分析………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………31.2英文摘要………………………………………………………51.3前言……………………………………………………………91.4材料与方法……………………………………………………121.5结果……………………………………………………………191.6讨论……………………………

2、………………………………281.7结论……………………………………………………………331.8参考文献………………………………………………………341.9英汉缩略词对照表……………………………………………402致谢……………………………………………………………413（综述）…………………………………………………………………42摘要目的：探讨本地区耐多药大肠埃希菌(Escherichiacoli，E．coli)产质粒AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）现状及其基因型分布，分析产AmpC酶大肠埃希菌对常用抗生素的耐药特点，为临床合理应用抗生素和防止耐药基因的广泛传播提供理论依据。方法：1.

3、初筛试验：根据临床实验室标准化机构（Clinicallabora-toryStandardsInsitute,CLSI）推荐的纸片扩散法（kerby-Bauer纸片扩散法）检测71株大肠埃希菌对头孢西丁的耐药性，即抑菌环≤18mm为可疑产AmpC酶阳性菌株。2.三维试验：根据Coudron等推荐的头孢西丁三维试验方法，通过大肠埃希菌的β-内酰胺酶提取物能否水解头孢西丁（FOX）来判定其是否产AmpC酶，从而检测出产AmpC酶菌株。3.纸片扩散法（Kerby-Bauer法,K-B法）：测定本地临床分离71株大肠埃希菌对头孢噻肟(CTX)、头孢吡肟（FEP)、头孢西丁（FOX)、氨曲南（

4、ATM)、亚胺培南（IPM)、庆大霉素（GEN)、阿米卡星（AMK)、链霉素（S)、环丙沙星（CIP）、左氧氟沙星(LEV)共10种抗菌药物的耐药性并筛选出产AmpC酶菌株菌株。4.PCR技术：检测三维实验阳性菌株的AmpC酶基因。参考文献设计6对特异性引物，采用普通质粒小提试剂盒提取大肠埃希菌质粒DNA用于PCR反应模板。各标本分别使用六对设计好的引物扩增，阳性扩增片段长度分别为520bp、462bp、405bp、346bp、302bp、190bp。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，紫外线检测仪观察结果。5.基因测序：分别取质粒AmpC酶基因扩增阳性的菌株的PCR扩增产物用核酸定量仪测得

5、DNA浓度>300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序。结果：1.头孢西丁三维试验：在71株大肠埃希菌中粗筛阳性产AmpC酶菌株共11株，通过头孢西丁三维试验分离出产AmpC酶的菌株8株，占总菌株数11.27%。2.药敏结果：（1）71株大肠埃希菌药敏结果显示对亚胺培南全敏感，阿米卡星，头孢西丁，氨曲南，头孢吡肟，敏感率较高均大于59.15%，较低的是头孢噻肟，链霉素，庆大霉素，环丙沙星，左氧氟沙星。（2）以耐多药菌株24株（33.80%）和双耐菌株35株为主（33.80%），其中耐多药模式的表型以GEN+CTX+LEV(16株，22.54%)为主。3.三维实验阳性菌株

6、（产AmpC2酶菌株）对多种常用抗生素的耐药率明显高于非产AmpC酶菌株（χ检验，P＜0.05)。4.PCR检测AmpC酶基因情况：对三维实验阳性的8株菌株行PCR扩增，2株呈阳性，测序结果显示2株均为DHA-1型。结论：1.泸州地区临床分离的大肠埃希菌中产ESBLs情况较严重，产AmpC酶的情况相对较少，并都呈现出多重耐药的现象。2.本地区的大肠埃希菌质粒介导的AmpC酶的基因型以DHA-1为主，且产AmpC酶菌株的耐药率明显高于非产AmpC酶菌株。3.本地区大肠埃希菌检测出2株疑似为SSBLs,其基因型组合均为DHA-1型AmpC酶和CTX-M型的ESBLs。关键词：大肠埃希菌；

7、AmpC酶基因；多重耐药Multidrug-resistantEscherichiacoliproducingAmpCenzymegenotypesstudyanddrugresistanceanalysisAbstract:Objective:ExploretheregionmoreresistantdrugEscherichiacoli(Escherichiacoli,E.coli)productionplasmidAmpCbeta-lactamase