ICU产ESBLS酶和AmpC酶大肠埃希菌的耐药性分析.pdf

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1、医学信息201o年12月第23卷第12期卫生謦⋯；i；；ICU产ESBLS酶和AmpC酶大肠埃希菌的耐药性分析苏国娟郭彦言【中图分类号]R378．2【文献标识码】B【文章编-~-]1006-1959(2010)12一O379—01大肠埃希菌是重症监护病房(ICU)感染的重要病原菌。随着广谱抗3讨论生素的大量使用，大肠埃希菌耐药性日趋严重，而超广谱B一内酰胺酶近年来，大肠埃希菌多重耐药株越来越常见，已成为ICU医院感染的(ESBLs)和AmpC酶作为目前国际上研究最为活跃的两类p一内酰胺酶，主要病原菌。本研究结果显示，大肠埃希菌对B一内酰胺酶类、喹诺酮类由此引起的

2、耐药给l临床治疗带来了极大困难，为了解本院ICU病房大肠等抗生素的耐药性均有不同程度的增高，大肠埃希菌对B一内酰胺酶类抗埃希菌的耐药性，更好地为l临床抗感染治疗提供依据，我们总结分析了我生素的耐药机制主要是产超广谱B一内酰胺(ESBLS)、头孢菌素酶院ICU患者中大肠埃希菌产AmpC酶和ESBLs的情况及耐药特征，现将(AMPC酶)及同时产两种酶(SSBL)。结果报告如下。ESBLs是由质粒介导的能水解青霉索类、1—4代头孢菌素类、单环1材料与方法内酰胺类抗生素的耐药性酶，由于作用底物广泛而称之，并可在菌株间转l_1菌株来源：2008年1月～2009年12月我院

3、ICU患者中分离移和传播[。AmpC酶又称诱导酶，通常情况下其表达水平较低，且无临的大肠埃希菌238株。质控菌株大肠埃希菌(ATCC25922)为不产酶株、床意义，但在8一内酰胺类抗生素等诱导剂的作用下则大量产生，导致其肺炎克雷伯菌(ATCC700603)为ESBLs质控菌株、阴沟肠杆菌(029M)对多种8一内酰胺类抗生素的耐药因此，准确检测和区分这两类酶，对为AmpC酶质控菌株。l临床选择用药有重要意义。超超广谱口一内酰胺酶(SSBL)细菌即同时产1．2细菌鉴定和药敏试验：用美国德灵公司的walkaway-96全自生ESBLs和质粒型AmpC酶，具有ESBL和

4、AMPC耐药性，对青霉索类，动微生物分析仪分析鉴定及药敏试验。1—4代头孢菌素类、单环酰类、头霉素类及含酶抑制剂的药物均高度1．3ESBLs检测：按CLSI推荐的标准纸片扩散法测定ESBLs，采用耐药。头孢噻肟(CTX，30ug)及头孢噻肟／克拉维酸(CTXL，30ug／10ug)组合、ICu是医院感染最严重的地方，我们采用标准纸片扩散法检测ES—头孢他啶(CAZ，30ug)及头孢他啶／克拉维酸(CAZI，30ug／ug)组合。任一组药敏的抑菌环直径相差≥5mm时，判定ESBLs阳性。以质控菌株肺BLs和三维试验检测AmpC酶，在238株分离的大肠埃希菌中200

5、株检炎克雷伯菌(ATCC700603)为ESBLs阳性对照。出AmpC酶和ESBLs，检出率高达84．0，其中单产ESBLs检出162株，1．4AmpC酶检测：采用酶提取物三维试验方法，参考文献[1]操检出率为68．1；单产AmpC酶检出23株，检出率为9．7；同一菌株同作。挑取血平板上过夜培养的数个待测菌落，加入3omL胰蛋白大豆肉时产ESBLs和AmpC酶，称之为超超广谱8一内酰胺酶(SSBLs)，我们共汤中，35℃恒温振荡培育7h，4℃4000r／rnin离心30min，取沉淀置一检出SSBLs菌株15株，检出率6．3。可见ICU大肠埃希菌产酶菌株比8O℃

6、反复冻融5次。加入1．5ml0．01mol／LPBS(pH7．4)旋涡混匀，率趋势很高，情况非常严峻。4℃13000r／min离心15min，取上清液，即为酶提取物。将0．5麦氏浊度从表1耐药性分析可以看出，产酶菌株对抗生素的耐药率高于不产的阴沟肠杆菌ATCC25922菌液密涂于MH琼脂平板，稍于后在平板中酶菌株，并且与喹诺酮类、氨基糖苷类等多种抗生素存在交叉耐药。这是心贴一30ug／片的头孢西丁纸片。用无菌刀片在离纸片边缘5mm处放由于ESBLs的耐药基因常由可结合性大质粒编码，后者可携带对喹诺酮射状地切一条狭缝，用微量加样器取20uL酶提取物加入狭缝内，避免

7、酶类、氨基糖苷类等多种抗生素的耐药基因形成具有多种耐药表型的多耐液溢出狭缝，待酶液稍干后置35℃孵箱过夜。若在狭缝与抑菌圈的交界药菌_3]。亚胺培南仍是所有被测药物中对大肠埃希菌抗茵作用最强的抗处出现扩大的长菌区域，判为三维试验阳性，即AmpC酶阳性以标准菌生素，本组耐药率为0；头霉类抗生素对大肠埃希菌的抗菌活性优于第株阴沟肠杆菌(029M)的酶粗提物为阳性对照。一1．5统计学处理：用wHONET5．3软件进行统计。、二代头孢菌素和多数三代头孢，氟喹诺酮类和氨基糖苷类耐药率较高。本组患者中产ESBLs株和产SSBLs菌株耐药率极高，除对亚胺培南2结果和哌拉西林／

8、他唑巴坦外几乎对其他所有