小鼠先天性白内障新型自发突变基因定位克隆

《小鼠先天性白内障新型自发突变基因定位克隆》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、附件一:东华大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我烙守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:翅顽亚日期:2010年01月18日附件二:东华大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。

2、本人授权东华大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密囱，在止主年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密口。指导教师签名:学位论文作者签名:赵丽亚日期:2010年01月18日日期2010年01月18日小鼠先天性白内障新型自发突变基因的定位克隆小鼠先天性白内障新型自发突变基因的定位克隆摘要先天性白内障(congenitalcataract)为出生时或出生后第一年内发生的晶状体混浊，临床上0.4%的新生儿患有先天性白内障，是常见的儿童致盲疾病。大约26%一51%的先天性白

3、内障是遗传因素导致的，因此，从分子机制上揭示先天性白内障的发病原因是防治该疾病的根本途径。2006年在ICRXBALB/cJ的Fl代群体中，发现2只自发突变导致白内障的小鼠。经与BALB/cJ进一步回交繁育，保持了稳定的显性常染色体遗传特征。本研究对杂合子与纯合子小鼠进行了性状鉴定，杂合子突变小鼠产生了核型和放射状白内障，而纯合子突变小鼠在刚出生就形成完全白内障。患病小鼠在13天左右出现晶状体混浊、角膜无异常、无行为学异常、无生殖障碍、生长发育也无异常。为定位突变基因，将携带白内障基因BALB/cJ品系与正常C3曰HeJ回交两代，建立了FZ代家系

4、，共挑选了83只白内障表型小鼠用于基因鉴定。第一步，通过全基因组扫描，对平均覆盖19条常染色体的共44个遗传位标在上述群体中分型，将基因定位到1号染色体上小鼠先天性白内障新型自发突变草因的定位克隆DIMit4lO(17eM)和DIMitl02(73eM)之间;第二步，在该区段内(56cM长)进一步挑选遗传位标，单倍型分析结果将白内障基因定位到DIMit236(25.7eM)和DIMit46(43.IcM)之间;第三步，选择DIMit236和DIMit46之间单倍型不同的样本13个，再次挑选遗传位标DIMitlg(36.9eM)和DIMit7(4I

5、cM)进行分型，将白内障相关基因进一步定位到DIMit236和DIMitlg之间约11。M内，此区间内存在晶状体蛋白基因Cryg(32cM)，故选择Cryg为候选基因。第四步，反转录出Cryg六个亚基的cDNA，cDNA测序分析发现在白内障纯合子样本的Crygc亚基第3外显子的Zogbp处缺失一个碱基，该突变在Crygc亚基第3外显子的76位引入终止密码子，形成截短蛋白。为进一步验证缺失突变是引起白内障的原因，对大样本进行测序和单核普酸鉴定，结果表明缺失基因型和白内障表型是完全连锁的，因此该突变应该是引起白内障的原因。由于突变位于高度保守的第四个

6、关键基序中，当其变短时，虽然RT一PCR半定量表明Crygc亚基mRNA能正常转录，但翻译成蛋白时，就会影响YC一晶状体蛋白的正常功能。生物信息分析突变的YC一晶状体蛋白时，突变型蛋白第二结构域的HMM是从1一“，丢失了巧个氨基酸，第二结构域中的保守区被破坏、变短，而保守序列对维持蛋白质的结构和功能是相当重要的，变短则影响了晶状体蛋白的功能，可能是形成白内障的原因。在蛋白质三维结构分析中，Yc一突变蛋白的C-末端缺失一个p一折叠，并且在检测三级结构模型的健康度时，因突变型蛋白从第3外显子的76位氨基酸后缺失，导致原子经验平均力势增小鼠先天性白内障

7、新型自发突变基因的定位克隆加，蛋白结构不稳定。综上所述，无论从基因型与白内障表型的遗传连锁、突变基因本身的性质变化均表明，单碱基缺失是形成该自发突变白内障小鼠的成因。关键词:遗传性白内障、动物模型、全基因组扫描、精细定位、RT一PCR、生物信息学小鼠先天性白内障新型自发突变基因的定位克隆CONGENITALCATARACTSPONTANEOUSMUTAI，IONGENEIDENTIFIEDINMICEBYPOSITOINALCLONINGABSTRACTCongenitaleataraet15lensoPaeityatb谊horafterb谊ho

8、eeurredwithinthefirstyear.Thereare0.4%ofnewbornsareeongenitaleatarae