家蚕突变种nb定位克隆研究

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1、摘要家蚕突变种刀6的定位克隆研究特种经济动物饲养专业硕士研究生刘品彦指导教师夏庆友教授要家蚕是重要的经济昆虫和遗传学研究材料，突变资源丰富，目前在全世界范围内火约保存了1000种左右的突变品种。在长达百年的遗传学研究中，已经有大约400种左右的突变种被定位在了全部28个迕锁群上，同时家蚕的RFLP、RAPD、AFLP、SSR、SNP图谱也相继完成。大约三十种左右的突变基因的分子遗传机理得到很好的阐明，特别是近三年，定位克隆技术发展迅速，并相继阐明了∥、nsd-2、OW、bts、C、mln等的突变机理。"6是家蚕少数几个体型突变种之一，其表

2、型为胸部狭小，位于19．31．2座位。本研究采用火造和砌为亲本构建BCl群体，通过筛选合适的SNP标记对肋展开了定位克隆研究，得到以下实验结果：1．甩6低密度图谱的构建本实验设计了27对用于初定位的标记引物，其中21对SNP引物和6对SSR引物。经过筛选，获得了14个可用于定位的标记。利用其中的10个标记和92个BCl代个体构建了低密度连锁图谱，该图谱包含40个交换个体。通过分析，结果显示玎6突变基因位于标记3和8之间的区域内，这两个标记的遗传距离为7．8cM，物理距离约为1．7Mb。2．，z6高密度图谱的构建实验新设计了15对用于精细定

3、位的SNP标记引物。经过筛选，获得了13个可用于定位的标记。利用初定位标记3和8从1794个BCl代个体中筛选得到67个可用于精细定位个体。利用获得的67个BCl代个体和8个标记构建了高密度连锁图谱，该图谱包含54个交换个体。通过分析，将柏突变基冈进一步锁定在了标记3l和38之间区域内，该区域物理跨度约为1Mb。3．定位区域内基因预测及信息分析基因预测结果显示定位区域内含有44个基冈。通过功能注释及芯片表达分析，30个基因具有功能注释，在五龄三天有表达的基因也是30个。通过对这些基因进行功能及表达聚类分析，发现具有结合功能的基冈最多，一共

4、有21个，有11个基冈在家蚕五龄3天的表皮中表达。我们对这11个基因进行了功能结构域分析和同源比对。关键词：砌定位克隆连锁图谱功能注释AbstractPositionalcloningofnbgeneRaisingofSpecialEconomicAnimalCandidate：PinyanLiuSupervisor：QingyouXiaProfessor一一一Silkwormisnotonlyanimportanteconomicinsectbutalsoagoodgeneticresearchmaterialwhichhasplent

5、ifulmutantsresource．About1，000mutantshavebeenpreservedworldwide．Inthecenturyofgeneticresearch．about400mutantsweremappedinallthe28linkagegroups，whiletheRFLERAPD，AFLESSR．SNPmapsofsilkwormwerealsocompleted．About30mutants’moleculargeneticmechanismwerewellstated．Especiallyinre

6、centyears．Thetechnologyofpositionalcloningshowsoutstandingresultinmoleculargeneticresearchofthemuntantsinsilkworm．Thegenesoffl,nsd-2，OW．bts．C，m／nhavebeenfoundbythistechnology．nbisoneofsomebodyshapemutanntsinsilkworm．Thebreastofthenbisnarrow,whichhasbeenmappedinthe19·31．2l

7、oucus．InthisresearchweuseddazaoandnbasparentalstraintOproduceBC,population．ByselectingtheSNPmarkerwecarriedoutthepositionalcloningofnbandgotsomeresultsasfollow：1．Constructionofnb’Slow-densitymap21primersetsweredisignedforroughmapping，whichinclude21SNPprimersetsand6SSRprim

8、ersetsinthe21sets．Weobtained14setswhichcouldbeusedformappingafterscreening．ByUsingtenofthesemark